[发明专利]一种基于氟固相萃取富集含半胱氨酸肽段并进行质谱分析的方法

权利要求书

1.一种基于氟固相萃取富集含半胱氨酸肽段并进行质谱分析的方法，其特征在于，采用氟化石墨材料为固相萃取吸附剂，实现蛋白酶解肽段混合物中含半胱氨酸肽段的分离富集和质谱鉴定，其包括步骤：

（1）在含有自由巯基肽段的多肽样品中，加入带有碘乙酰胺反应基团的氟标签衍生试剂，在含有体积比20%-60%乙腈、25-100毫摩尔/升碳酸氢铵的水溶液中进行氟标签衍生，反应的时间为1-4小时，反应温度为37-60摄氏度；

（2）在含有体积比20-60%甲醇、25-100毫摩尔/升碳酸氢铵的水溶液中，加入1-4毫克氟化石墨以及氟标签衍生后的多肽样品，均匀分散，共孵育5-30分钟，结合离心分离的方法，收集下层固体；

（3）用含有体积比20-60%甲醇、25-100毫摩尔/升碳酸氢铵的水溶液清洗固体相，每次清洗后，结合离心分离的方法，收集下层固体，洗涤次数为2-3次，每次清洗的时间为5-10分钟；

（4）用含有体积比80%-100%甲醇的水溶液再混匀固相；结合离心分离的方法，收集上层清液，进行进一步的质谱分析。