[发明专利]一种酶法制备邻苯酚类化合物的方法

权利要求书

1.一种酶法制备邻苯酚类化合物的方法，其特征在于：是采用无载体固定化酪氨酸酶为催化剂，以单苯酚类化合物为底物，二甲基亚砜为助溶剂，L-抗坏血酸为还原剂，在15~40℃下反应1~7h，得到邻苯酚类化合物；所述邻苯酚类化合物为3'-羟基紫檀茋或白皮杉醇；

所述单苯酚类化合物的用量为溶质总质量的10~50%（wt.%），无载体固定化酪氨酸酶的用量为溶质总质量的5~50%（wt.%），L-抗坏血酸的用量为溶质总质量的15~80%（wt.%）；所述二甲基亚砜的用量为溶液总体积的10~50%（v/v）；

所述无载体固定化酪氨酸酶，是采用交联酶聚集体技术制备得到，包括下述步骤：（1）蘑菇中酪氨酸酶的提取：新鲜白色双孢菇洗净晾干后，将双孢菇：磷酸缓冲液按质量体积比g/ml为1:（1~3）的比例混合，所述磷酸缓冲液为pH6.0、50mM；然后用匀浆机捣碎，过滤除去残渣后，将酪氨酸酶溶液冷冻储存；（2）无载体固定化：在室温下将冻存的酪氨酸酶溶液解冻，加入硫酸铵至40~80%饱和度，继续振摇，待硫酸铵全部溶解后，加入25%（wt.%）的戊二醛，使酪氨酸酶溶液中戊二醛的量达到0.15~0.35%（wt.%），在4℃下继续搅拌12~18h，得到浊液；然后将浊液离心，去上清后加入磷酸缓冲液清洗沉淀，所述磷酸缓冲液为pH6.0、50mM，然后离心重复清洗3~5 次，至上清完全没有酶活即把未固定化的酪氨酸酶洗掉为止；再将沉淀冷冻干燥12~18h至重量不再减少为止，得到无载体固定化酪氨酸酶。

2.根据权利要求1所述的酶法制备邻苯酚类化合物的方法，其特征在于：当采用无载体固定化酪氨酸酶制备3'-羟基紫檀茋时，底物紫檀茋的用量为15~45%（wt.%），还原剂L-抗坏血酸的用量为15~55%（wt.%），无载体固定化酪氨酸酶的用量为5~40%（wt.%），反应的温度为15~40℃，反应时间1~7h，合成3'-羟基紫檀茋；生成的3'-羟基紫檀茋会被氧化成相应的醌，再进一步用L-抗坏血酸将醌还原为3'-羟基紫檀茋。

3.根据权利要求2所述的酶法制备邻苯酚类化合物的方法，其特征在于：底物紫檀茋的用量为30%（wt.%），无载体固定化酪氨酸酶的用量为29%（wt.%），还原剂L-抗坏血酸的用量为41%（wt.%），温度为25℃，反应时间为4h。

4.根据权利要求1所述的酶法制备邻苯酚类化合物的方法，其特征在于：用无载体固定化酪氨酸酶制备白皮杉醇时，底物白藜芦醇的用量为15~45%（wt.%），二甲基亚砜的用量为20~50%（v/v），无载体固定化酪氨酸酶的用量为5~40%（wt.%）， L-抗坏血酸的用量为15~55%（wt.%），反应温度为15~40℃下，反应时间为1~7h，合成白皮杉醇；生成的白皮杉醇会被氧化成相应的醌，再进一步用L-抗坏血酸将醌还原为白皮杉醇。