[发明专利]IL21融合蛋白及其制备方法和在制备靶向治疗肿瘤药物中的用途

说明书

本发明属于基因工程技术领域，涉及IL21融合蛋白及其制备方法和制药中的用途，本发明通过基因工程技术构建出表达IL21‑ApoA1融合蛋白的质粒，转入相应表达载体中，表达IL21‑ApoA1融合蛋白，其ApoA1部分可将白细胞介素21选择性地运输到肾、肝等器官，促进T淋巴细胞、NK细胞杀伤肿瘤细胞，且提高白细胞介素21在体内的半衰期，延长其作用。本发明在体内、外均表现出良好的生物活性和稳定性，能有效抑制肿瘤生长，同时延长白细胞介素21的血浆半衰期。所述IL21‑ApoA1融合蛋白可制备靶向免疫治疗肿瘤药物。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，涉及IL21融合蛋白及其制备方法和在制备靶向治疗肿瘤药物中的用途，具体涉及一种IL21-ApoA1融合蛋白（基因）、其编码核苷酸序列以及融合蛋白（基因）及其制备方法和在制备靶向免疫治疗肿瘤药物中的用途。

背景技术

资料显示了恶性肿瘤严重影响人类健康甚至威胁生命，中国恶性肿瘤的发生率和死亡率逐年上升。临床实践中通常采用外科手术、放化疗等干预方式，由于肿瘤具有难以根治、易复发和易浸润转移的特点，传统治疗手段效果差强人意，因此新型肿瘤治疗方法亟需出现。自上个世纪五十年代开始，肿瘤免疫学进入公众视野，其通过外源性药物激发体内免疫系统，刺激和调节体内免疫细胞，进而改善机体肿瘤微环境，从而控制并杀伤肿瘤细胞；肿瘤免疫疗法包括若干治疗手段，其中细胞因子治疗是研究相对成熟的一类肿瘤免疫疗法。

研究报道白细胞介素是调节机体免疫系统最重要的一大类细胞因子，目前已发现38种白细胞介素，其中白细胞介素2家族在免疫生理、病理，尤其是肿瘤免疫应答方面发挥极其重要的作用。研究显示，白细胞介素2家族中白细胞介素21由CD4+T细胞和NKT细胞产生，其可促进CD4+T细胞分化成T17细胞，后者会引起炎症；白细胞介素21还可以通过抗CD4抗体共刺激促进成熟B细胞的增殖，进而分化为浆细胞（PC），合成和分泌各类抗体；也可促进CD8+T细胞和NK细胞的产生，产生直接的细胞毒性，后者还可产生抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用（ADCC）；还可促进补体激活后产生的膜攻击复合物，发挥抗体依赖的细胞毒性作用；另外，白细胞介素21能使γ/δ T细胞分化为中心记忆细胞，与肠道炎症有关；促使骨髓单个核细胞向树突状细胞（DC）分化，但其抑制成熟DC的功能，等。Sondergaard H等研究发现IL-21在治疗小鼠B16黑色素瘤和RenCa肾癌过程中，通过增加肿瘤中CD8⁺ T淋巴细胞密度从而抑制肿瘤生长。实践显示，目前白介素-21血浆半衰期为2-4h，在临床应用中存在不足，部分研究表明融合蛋白可弥补这一缺陷，Gassen RB等构建表达了融合蛋白IL-21/免疫球蛋白，以延长IL-21体内半衰期，但其构建的融合蛋白缺乏靶向性。

研究还公开了血清载脂蛋白A1是人高密度脂蛋白（HDL）的重要组成部分，血清载脂蛋白中高密度脂蛋白体积最小、密度最高，具有促进胆固醇的代谢的作用；通过HDL介导的胆固醇逆向转运，可减少脂质在血管壁的沉积，降低血浆和血管壁中的胆固醇水平；血清载脂蛋白A1占HDL的70%，由肝脏或小肠分泌的血清载脂蛋白A1和内皮细胞表明的三磷酸腺苷结合转运体A1结合后，逐步形成成熟的HDL；在机体中，肾脏、肝脏等器官均存在血清载脂蛋白A1受体，肿瘤细胞表面大多存在ApoAI受体。

基于现有技术的现状，本申请的发明人拟供新的IL21融合蛋白及其制备方法和用途；尤其提供一种IL21-ApoA1融合蛋白及其在制备靶向治疗肿瘤药物中的用途。

发明内容

本发明的目的是克服普通重组人白细胞介素21在体内半衰期短的不足之处，提供白细胞介素21的新用途，具体涉及IL21融合蛋白及其制备方法和用途；尤其提供一种IL21-ApoA1融合蛋白及其在制备靶向治疗肿瘤药物中的用途。