[发明专利]一种诱导菠菜根尖细胞有丝分裂同步化的方法

权利要求书

1.一种诱导菠菜根尖细胞有丝分裂同步化的方法，其特征在于：采用羟基脲和N₂O双阻断法诱导菠菜细胞进行同步化有丝分裂以获得大量中期分裂相细胞。

2.根据权利要求1所述的诱导菠菜根尖细胞有丝分裂同步化的方法，其特征在于具体步骤为：

（1）根尖培养：将菠菜种子在30℃的水中浸泡24h，再将种子放在铺2-3层用水浸湿的滤纸的培养皿中，然后于25℃培养4天至根长为0.5-1.5cm；

（2）羟基脲处理：在25℃条件下用摩尔浓度为3mmol/L的羟基脲处理根长为0.5-1.5cm的菠菜种子18h；

（3）恢复培养：将羟基脲去除，用清水清洗种子三遍，然后在25℃的清水中培养根尖6-8h；

（4）N₂O预处理：切取根尖放入N₂O气室中处理1-3h；

（5）固定：用体积分数为90%的乙酸冰上固定根尖10min。

3.根据权利要求2所述的诱导菠菜根尖细胞有丝分裂同步化的方法，其特征在于：步骤（1）中菠菜根长优选为1cm。

4.根据权利要求2所述的诱导菠菜根尖细胞有丝分裂同步化的方法，其特征在于：步骤（3）中清水培养根尖的时间优选为7h。

5.根据权利要求2所述的诱导菠菜根尖细胞有丝分裂同步化的方法，其特征在于：步骤（4）中N₂O的处理压强为1.01MPa，N₂O的处理时间优选为2h。

6.根据权利要求2所述的诱导菠菜根尖细胞有丝分裂同步化的方法，其特征在于：经过步骤（5）处理后，将固定好的根尖水洗后置于离析液中离析1.5min，该离析液是体积比为1:1的浓盐酸与无水乙醇的混合液，再水洗去除离析液后切下2mm长的根尖生长点部分放在载波片上，充分切碎后滴加改良品红染液染色15min，加上盖玻片进行常规压片，然后将玻片置于显微镜下观察，拍照并计算有丝分裂中期分裂相比例。