[发明专利]一种碳量子点靶向检测溶酶体中H2S的方法

说明书

本发明涉及一种碳量子点靶向检测溶酶体中H₂S的方法,属于生物传感器及离子识别领域。本发明合成的碳量子点CD‑dopa‑morph荧光探针与H₂S由于光诱导电子转移在575nm处的荧光强度会明显增强。本发明的碳量子点荧光探针对H₂S检测最低限度达到70nM。本发明的碳量子点荧光探针合成方法简单、生物相容性好、细胞毒性小、检测灵敏度高、检测迅速且信号稳定，为实现临床检测细胞溶酶体中的H₂S提供了可能。

技术领域

本发明涉及一种碳量子点靶向检测溶酶体中H₂S的方法，属于生物传感器及离子识别领域。

背景技术

近年来，发现硫化氢(H₂S)广泛存在于包括人类在内的哺乳动物体内，尤其是细胞的溶酶体，而且起着非常重要的生物学作用。硫化氢已经被认为是继一氧化氮(NO)和一氧化碳(CO)之后的第三种气体信号分子，具有多种生理功能，包括调制血压，缓解缺血性再灌注损伤，发挥抗炎作用，降低代谢率等。硫化氢水平的改变与多种疾病相关，如唐氏综合征、阿尔茨海默病等。

硫化氢的检测技术有很多如：极谱技术、电极技术、色谱技术等，上述方法虽然可以用于硫化氢检测，但是存在很大局限性，且无法用于体内检测。为了深入研究硫化氢在体内的生理学作用，迫切需要开发应用于体内、实时、快速、选择性的检测硫化氢的技术。为了解决上述问题，开发了荧光检测技术，这种检测技术具有高灵敏度、无损探伤，已经用在了硫化氢的检测中，并且已经合成几种靶向检测溶酶体中硫化氢的探针。然而，目前检测硫化氢的探针都是有机小分子荧光探针，存在光稳定性差、合成步骤复杂、水溶性差等问题。

碳量子点作为一种新型的荧光碳纳米材料，这些年引起广泛关注，主要是由于光稳定性好、生物相容性好、水溶性好、表面易修饰等优点，这也证明了碳量子点在生物领域有很大的应用前景。最近， Liu et al.发表了一篇采用碳量子点检测环境中H₂S的文章，但是目前还没有碳量子点检测人体内H₂S的文章，而且H₂S主要存在于细胞的溶酶体中。因此，开发一种选择性好、灵敏度高、检测迅速且具有靶向检测溶酶体内H₂S的方法，将对H₂S的研究发展具有至关重要的作用。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有荧光探针生物相容性差、细胞毒性大的问题，提供一种碳量子点靶向检测溶酶体中H₂S的方法，该方法创造性的提出生物相容性好、细胞毒性小的碳量子点作荧光探针用于细胞溶酶体内硫化氢的检测，为实现临床检测细胞溶酶体中的H₂S 提供了可能。

本发明的目的是通过下述技术方案实现的。

一种碳量子点靶向检测溶酶体中H₂S的方法，具体步骤如下：

步骤一、用pH＝5.0的甘氨酸缓冲液，将碳量子点CD-dopa-morph 配置成已知浓度的碳量子点分散液。

步骤二、将上述分散液转移到石英比色皿中，配置500μM浓度的NaHS储备液，每次加入储备液并进行荧光强度测试，保证每次加入后能够形成0.1μM、0.2μM、0.3μM、0.4μM、0.5μM、0.6μM、 0.7μM、1μM、2μM、3μM、4μM的浓度梯度，所述加入的储备液总体积不大于石英比色皿中分散液总体积的5％。