[发明专利]家蚕BmST基因及其应用

说明书

本发明涉及一种家蚕BmST基因及其应用，家蚕BmST基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，通过瞬时转染和转基因的方法分别增加该基因在BmE细胞及家蚕体内的表达量，结果显示增量表达该基因能够显著抑制BmNPV和BmCPV病毒的增殖，说明该基因是一个影响家蚕对多种病毒抗性的关键基因，为家蚕转基因抗性品种的培育提供理论基础和靶标基因。

技术领域

本发明属于基因工程领域，具体涉及家蚕BmST基因，还涉及家蚕BmST基因的应用。

背景技术

家蚕是一种重要的经济昆虫，蚕丝是丝绸工业的重要原料。在中国、印度、巴西等发展中国家，养蚕业是农民经济收入的一个重要来源，甚至是某些地区的支柱性产业。但是，家蚕却面临严重的疾病威胁，每年因蚕病引起的损失占蚕业生产总收入的20％左右。病毒病是对养蚕业威胁最严重的一类疾病，主要由家蚕核型多角体病毒(BmNPV)和家蚕质型多角体病毒(BmCPV)引起。

由于BmNPV和BmCPV在蚕业生产上危害严重，科研工作者一直希望找出影响家蚕对病毒抗性的关键基因，然后通过转基因遗传改良来提高家蚕对病毒的抗性。对影响家蚕病毒抗性的关键基因全长序列进行克隆和鉴定，为阐明家蚕抵抗病毒的机制，以及培育抗性品种应用于蚕业生产有着重要的理论价值和实践意义。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种来自于家蚕的对多种病毒具有抗性的关键基因，还提供该基因的应用。

本发明中，由于家蚕基因组数据库(http://silkworm.swu.edu.cn/silkdb/)中没有该基因表达序列标签(Expressed sequence tag，EST)，说明表达量非常低，全长序列克隆非常困难。因此为克隆此基因，本发明设计引物，克隆了家蚕BmST基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，分析发现该基因包括一个Somatomedin B-like结构域和一个Thrombospondin type 1repeats结构域。通过RT-PCR和qPCR对该基因的时期组织表达情况进行了检测，研究结果进一步证实该基因的表达量极低。为了研究该基因的功能，通过增量表达的方式来提高细胞和家蚕体内该基因的表达量，然后感染病毒，检测病毒增殖是否受到抑制。构建了增量表达BmST的瞬时转染载体，转染BmE细胞，然后感染BmNPV-GFP病毒，荧光观察和qPCR检测都显示BmNPV病毒的增殖被明显抑制；构建增量表达BmST的转基因载体，通过胚胎显微注射制备转基因家蚕，分别经口添食感染BmNPV和BmCPV，qPCR检测结果显示转基因家蚕体内的病毒含量显著低于非转基因对照，说明BmST基因是一个影响家蚕抗性的关键基因，可以作为家蚕转基因抗病育种的靶标基因。

具体应用如下：

家蚕BmST基因在培育抗家蚕核型多角体病毒的家蚕品种中的应用，所述家蚕BmST基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

家蚕BmST基因在培育抗家蚕质型多角体病毒的家蚕品种中的应用，所述家蚕BmST基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

家蚕BmST基因在培育抗家蚕核型多角体病毒和家蚕质型多角体病毒的家蚕品种中的应用，所述家蚕BmST基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

家蚕BmST基因在制备抑制家蚕核型多角体病毒增殖的药物中的应用，所述家蚕BmST基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

家蚕BmST基因在制备抑制家蚕质型多角体病毒增殖的药物中的应用，所述家蚕BmST基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

家蚕BmST基因在制备抑制家蚕核型多角体病毒和家蚕质型多角体病毒增殖的药物中的应用，所述家蚕BmST基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。