[发明专利]一种基于生物3D打印构建皮肤组织的方法

权利要求书

1.一种基于生物3D打印构建皮肤组织的方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）除脂，分离鱼皮、软骨、肌腱、牛蹄筋、猪蹄或皮肤组织；

（2）采用酸酶结合法处理，加入胃蛋白酶消化抽提3天，取上清液；

（3）向粗提液中加入碳酸钾、碳酸钠、氯化钠、氯化钾、硫酸钾或硫酸钠盐析；

（4）将得到的胶原作为打印皮肤的墨水原料灌注于生物打印机的打印室中，打印室温度控制在4 ^oC；

（5）通过层叠打印技术在温度为37 ^oC的热台上打印任意形状和大小的皮肤；

（6）将所打印的皮肤置于容器中冷冻干燥；

（7）将冻干的皮肤组织置于甲醛或戊二醛中交联6小时，并用磷酸盐缓冲液或纯水洗净；

（8）最后浸没于乙醇水溶液中冻干保存。

2.根据权利要求1所述的一种基于生物3D打印构建皮肤组织的方法，其特征在于：所述步骤（1）中小心去除皮下脂肪，将组织剪成小块，温度控制于22-30^oC，用纯水洗涤，放于常温下晒干后放置于4 ^oC冷柜中备用。

3.根据权利要求1所述的一种基于生物3D打印构建皮肤组织的方法，其特征在于：所述步骤（2）中将组织浸泡于醋酸溶液中，抽提过程于4 ^oC环境下进行，所述胃蛋白酶加入比例为10:1。

4.根据权利要求1所述的一种基于生物3D打印构建皮肤组织的方法，其特征在于：所述步骤（3）中将滤液充分搅拌至胶原完全沉淀析出，10000转/分钟离心15分钟，收集沉淀。

5.根据权利要求1所述的一种基于生物3D打印构建皮肤组织的方法，其特征在于：所述步骤（4）中将胶原移至4 ^oC打印室并混匀，消除气泡。

6.根据权利要求1所述的一种基于生物3D打印构建皮肤组织的方法，其特征在于：所述步骤（5）中每层打印厚度为500微米，总共打印十层，总厚度5毫米，所述打印平台的湿度为95%。

7.根据权利要求1所述的一种基于生物3D打印构建皮肤组织的方法，其特征在于：所述步骤（6）中将所打印皮肤组织迅速放置于-80 ^oC下冷冻，然后将其转入冷冻干燥机内冻干。

8.根据权利要求1所述的一种基于生物3D打印构建皮肤组织的方法，其特征在于：所述步骤（7）中将冻干的皮肤组织完全浸泡于交联剂内，交联后除去交联剂，用磷酸盐缓冲液或纯水洗净。

9.根据权利要求1所述的一种基于生物3D打印构建皮肤组织的方法，其特征在于：所述步骤（8）中小心将皮肤组织取出并浸泡于乙醇水溶液中，置于合适容器中继续冷冻干燥。