[发明专利]L-苏氨酸转运蛋白ThrF及其编码基因与应用

说明书

本发明公开了一种L‑苏氨酸转运蛋白ThrF及其编码基因与应用。本发明提供的蛋白质，命名为ThrF蛋白，是如下(a)或(b)：(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；(b)将序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与L‑苏氨酸转运相关的由序列1衍生的蛋白质。编码ThrF蛋白的基因也属于本发明的保护范围，将其命名为thrF基因。本发明还保护ThrF蛋白的应用：作为L‑苏氨酸转运蛋白；促进L‑苏氨酸转运；促进L‑苏氨酸转运至微生物体外生产L‑苏氨酸。本发明具有重大的应用价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种L-苏氨酸转运蛋白ThrF及其编码基因与应用。

背景技术

L-苏氨酸是必需氨基酸之一，在医药、食品以及饲料领域有广泛的应用。食品领域，是一种重要的营养强化剂，可以强化谷物、糕点、乳制品，有缓解人体疲劳，促进生长发育的效果。医药领域，对人体皮肤具有持水作用，对保护细胞膜起重要作用，在体内能促进磷脂合成和脂肪酸氧化。饲料领域，广泛用作仔猪饲料、种猪饲料、肉鸡饲料、对虾饲料和鳗鱼饲料等的添加物，可调整饲料中氨基酸平衡促进生长，可改善肉质，可降低畜禽粪便和尿液中的含氮量、畜禽舍中氨气浓度及释放速度。

氨基酸的转运是细胞生命活动的重要环节之一。在原核以及真核细胞中都存在氨基酸转运系统。细胞通过內运系统从外部环境摄取氨基酸用于细胞内物质的合成，为生命活动提供碳源和氮源以及能源。通过外运系统将代谢物分泌到细胞外。大多数氨基酸可以通过发酵法生产。基于对氨基酸转运系统的了解，可以在氨基酸生产菌株的理性改造方面定向对其进行修饰，从而实现提高产量的目的。

发明内容

本发明的目的是提供一种L-苏氨酸转运蛋白ThrF及其编码基因与应用。

本发明提供的蛋白质，获自谷氨酸棒杆菌(C.glutamicum)，命名为ThrF蛋白，是如下(a)或(b)：

(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)将序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与L-苏氨酸转运相关的由序列1衍生的蛋白质。

上述蛋白中，所述一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加是指不多于十个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加。

为了使(b)中的蛋白质便于纯化和检测，可在由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上如表1所示的标签。

表1标签的序列

上述(b)中的蛋白质可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。上述(b)中的蛋白质的编码基因可通过将序列表中序列2所示的DNA序列中缺失一个或几个氨基酸残基的密码子，和/或进行一个或几个碱基对的错义突变，和/或在其5′端和/或3′端连上表1所示的标签的编码序列得到。

编码ThrF蛋白的基因也属于本发明的保护范围，将其命名为thrF基因。

thrF基因为如下1)至4)中任一所述的DNA分子：

1)编码区如序列表中序列2所示的DNA分子；

2)序列表中序列7所示的DNA分子；

3)在严格条件下与1)或2)限定的DNA序列杂交且编码L-苏氨酸转运相关蛋白的DNA分子；

4)与1)或2)限定的DNA序列具有90％以上同源性且编码与L-苏氨酸转运相关蛋白的DNA分子。

上述严格条件可为用0.1×SSPE(或0.1×SSC)，0.1％SDS的溶液，在DNA或者RNA杂交实验中65℃下杂交并洗膜。