[发明专利]一种金属铽荧光探针检测肾上腺素的方法及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及药物分析和生物分析技术领域，具体涉及一种金属铽荧光探针检测肾上腺素的方法及其用途。

背景技术

肾上腺素(E)是哺乳动物(含人类)中枢神经系统重要的神经传递物质，属于自然产生的儿茶酚胺类物质之一，它在机体内的浓度大小影响多种生理过程，其代谢的紊乱可导致某些疾病的发生。肾上腺素盐酸盐药物在医学上常用来治疗急性心力衰竭、过敏性休克、哮喘、鼻充血、低血压等疾病。肾上腺素是第一个获得结晶形式的激素。由于肾上腺素具有邻苯二酚结构，所以有较强的还原性，在空气或水溶液中易被氧化，稳定性差。在人体内，肾上腺素经由下列一系列生化反应过程形成：酪氨酸→多巴→多巴胺→去甲肾上腺素→肾上腺素(Mohammad,M.K.,M.A.Seikh.and H.L.Sang.Spectrofluorimetric Estimation of Norepinephrine Using Ethylenediamine Condensation Method.J.fluoresce.2007,17(3):427–436.)。因此，研究其测定方法尤其是微量肾上腺素的测定方法对生理机能和临床医学研究具有重要的实际意义。

目前测定肾上腺素的方法主要有高效液相色谱法，电化学法，荧光法和化学发光法等。高效液相色谱法对样品前处理要求较高，检测速度较慢，技术难度高，对实际生物样品的检测有一定的局限性。电化学分析法目前报道较多的是化学修饰电极法，该方法测定生物样品，稳定性较差且修饰电极的电极使用寿命较短，方法有待进一步完善。荧光法具有操作简便、灵敏度高、低成本等特点，在肾上腺素等药物的测定中具有独特的优越性。

发明内容

本发明的目的是克服高效液相色谱法对样品前处理要求较高，检测速度较慢，技术难度高等缺点，提供一种金属铽荧光探针检测肾上腺素的方法及其用途，本发明中，Tb(III)与乙二胺四乙酸二钠盐(EDTA)形成络合物，加入肾上腺素作为协同配体，可形成稳定的三元络合物Tb(III)―EDTA―E，该三元络合物能发射出Tb(III)的特征荧光。在此三元络合物体系中加入阴离子表面活性剂十六烷基三甲基氯化铵(CTAC)作为增敏剂，能显著增加三元络合物的荧光强度，在302nm激发波长下，三元络合物在545nm处发射出铽的特征荧光；与不加增敏剂的体系相比，加入增敏剂后三元络合物的荧光强度增大了4倍多。据此建立了肾上腺素的检测方法，该方法灵敏度高，操作简单，检出限低。

根据本发明的第一个方面，本发明提供了一种金属铽荧光探针检测肾上腺素的方法，包括以下步骤：

1)在10mL的比色管中，依次分别加入肾上腺素水溶液、Tb(III)-EDTA水溶液、NaOH水溶液和十六烷基三甲基氯化铵水溶液，用水稀释到刻度，摇匀，静置20min使其充分反应得供试品溶液；

2)反应完毕后取供试品溶液，置于1cm比色皿，在激发波长302nm，发射波长545nm处测定体系的荧光强度I值，同时测定试剂空白的荧光强度I₀值；

供试品溶液中肾上腺素测量的相对荧光强度定义为△I，其中△I＝I–I₀；

所述试剂空白I₀值的测定除不加肾上腺素外，其余步骤同步骤1)；

所述Tb(III)-EDTA水溶液由等摩尔的Na₂EDTA或其水合物与TbCl₃或其水合物在无机碱的水溶液中制备而成。

所述供试品溶液中Tb(III)-EDTA浓度为1.0×10^-3mol/L，NaOH浓度为0.01mol/L。

所述供试品溶液中十六烷基三甲基氯化铵浓度为2.0×10^-4mol/L。

本发明肾上腺素浓度在7.0×10^-8～5.0×10^-5mol/L范围内，体系的相对荧光强度△I(△I＝I–I₀)与肾上腺素的浓度成正比。线性回归方程为△I＝16.78×10^-4C+7.36，式中C为肾上腺素浓度(mol/L)，根据线性回归方程可计算出任意荧光强度所对应的肾上腺素的浓度。

根据本发明的另一个方面，本发明金属铽荧光探针检测肾上腺素的方法的可用于检测肾上腺素含量。

含量的具体检测方法包括以下步骤：

1)绘制标准工作曲线