[发明专利]一种滋养细胞刺激NK细胞扩增的方法和用途在审
| 申请号： | 201710025596.4 | 申请日： | 2017-01-13 |
| 公开（公告）号： | CN108300697A | 公开（公告）日： | 2018-07-20 |
| 发明（设计）人： | 黄飞;何凤;赵晓楠;金涛;王海鹰;史子啸 | 申请（专利权）人： | 上海恒润达生生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/867;A61K35/17;A61P35/00 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 201210 上海市浦东新*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 滋养 细胞刺激 扩增 生物技术领域 细胞 体外扩增 序列信息 高纯度 构建 制备 应用 | ||
1.一种基因工程细胞，其特征在于，所述基因工程细胞K562-APC3-mbIL21，其细胞膜表面稳定表达CD64、CD86、41BBL和膜固定IL-21。
2.如权利要求1所述的构建K562-APC3-mbIL21所编码的氨基酸序列，其特征在于
所述CD64的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；
所述CD86的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示；
所述41BBL的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示；
所述mbIL21的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示。
3.如权利要求2所述的多核苷酸序列，其特征在于
所述CD64的多核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；
所述CD86的多核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示；
所述41BBL多核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示；
所述mbIL21多核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示。
4.根据权利要求1所述的一种基因工程细胞，其特征在于，所述基因工程细胞为K562-APC3-mbIL21细胞。
5.权利要求1所述的基因工程细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)构建分别表达CD64、CD86、41BBL和mbIL-21的慢病毒载体；
(2)CD64、CD86、41BBL三个慢病毒共转染K562细胞，流式细胞表达检测，获得CD64、CD86、41BBL稳定表达K562细胞在此基础上导入细胞膜表面稳定表达的IL-21，建立K562-APC3-mbIL21。
6.根据权利要求5所述的基因工程细胞的制备方法，其特征在于，所述基因工程细胞为K562-APC3-mbIL21细胞。
7.权利要求1或4所述的基因工程细胞在NK细胞扩增中的应用。
8.一种NK细胞扩增方法，其特征在于，利用权利要求1所述基因工程细胞进行扩增，包括以下步骤：
(1)构建CD64、CD86、41BBL和mbIL-21表达的慢病毒载体；
(2)CD64、CD86、41BBL三个慢病毒共转染相应细胞，流式细胞表达检测，获得CD64、CD86、41BBL稳定表达细胞在此基础上导入细胞膜表面稳定表达的IL-21，建立K562-APC3-mbIL21；
(3)致死性照射或丝裂霉素处理步骤(2)获得的基因工程细胞，按1:2与分选后的NK细胞混合，在NK细胞扩增培养液中共培育；
(4)每周重复刺激1次，连续刺激2周，以获得足够量的NK细胞。
9.根据权利要求8所述的一种NK细胞扩增方法，其特征在于，所述基因工程细胞为为K562-APC3-mbIL21。
10.如权利要求1-9任一项所述的高效扩增NK细胞的方法在细胞治疗领域中的应用。
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