[发明专利]一种甲状腺球蛋白酶联免疫诊断试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于医药生物技术领域，具体涉及一种甲状腺球蛋白酶联免疫诊断试剂盒。

背景技术

甲状腺疾病在我国是常见病、多发病。甲状腺球蛋白(TG)是甲状腺特有的一种抗原，具有重要的临床意义，在各种甲状腺疾病患者血清中都会有不同程度地出现TG异常。临床上通过测定TG的含量，有助于甲状腺疾病的诊断。

TG是甲状腺滤泡上皮分泌的660ku糖蛋白，每个TG约有2个甲状腺素(T4)和0.5个三碘甲腺原氨酸(T3)分子，储存在滤泡腔中。溶酶体水解TG表面T4、T3并使之释放入血，同时少量的TG也释放入血，部分TG经甲状腺淋巴管分泌入血。血循环中的TG被肝脏的巨噬细胞清除。血清TG的改变较多见于甲状腺部位的恶性肿瘤，如TG在甲状腺滤泡状癌、甲状腺乳头状癌和间变癌都可出现不同程度的升高；而甲状腺髓样癌血TG可正常或降低。前者主要是因为甲状腺的破坏以及肿瘤组织分泌一定量的TG，而致血中TG升高；后者的肿瘤组织来源于甲状腺C细胞，而非甲状腺上皮细胞，故其血清TG并不升高。甲状腺功能亢进症、甲状腺瘤、亚急性甲状腺炎以及慢性淋巴细胞性甲状腺炎等甲状腺疾病都可出现血中TG水平升高。从检测的角度上来说，目前临床上用于测定TG的方法主要有放射免疫分析法、酶联免疫法(ELISA)、化学发光免疫分析法等。

过去以放射免疫分析法为代表的甲状腺球蛋白(TG)测定试剂盒受方法学的限制，其灵敏度和抗干扰能力严重不足，存在很大的弊端，已基本上退出市场；化学发光免疫分析法的操作复杂，有效期短，不利于推广应用；ELISA法作为定性和半定量的检测方法，抗原、抗体的结合反应是在固相(ELISA板反应孔)表面进行的，其灵敏度、特异性均较好，且经济实惠，所以是应用得最广、最多的方法。但是在酶联免疫诊断试剂盒使用中，试剂盒的稳定性是制约产品市场化的关键。现在市场不同厂家生产的甲状腺球蛋白酶联免疫诊断试剂盒普遍存在着保存期短、稳定性差等问题，极大限制了甲状腺球蛋白酶联免疫诊断试剂盒在临床上推广和应用。国外已有多项的有关稳定剂的专利和产品问世，而国内在诊断试盒稳定剂方面尚在探索阶段，稳定剂研究成为我国酶联免疫诊断试剂盒研发必须克服的技术瓶颈。目前，已有针对蔗糖、海藻糖、乳糖、明胶、甘油、山梨醇、谷氨酸钠、聚乙二醇等稳定剂的研究。

发明内容

为了解决现有甲状腺球蛋白酶联免疫诊断试剂盒中普遍存在的保存期短、稳定性差等问题，本发明提供了一种甲状腺球蛋白酶联免疫诊断试剂盒，该试剂盒具有良好的稳定性，在室温条件下有效期为1年，在4℃条件下有效期可达3年，显著提高了试剂盒的保存期。

本发明提供的甲状腺球蛋白酶联免疫诊断试剂盒，由甲状腺球蛋白多克隆抗体包被板、对照缓冲液、酶标记液、洗涤液、显色液、底物液、甲状腺球蛋白标准品和终止液组成；

其中，所述甲状腺球蛋白多克隆抗体包被板的制备过程为：将包被用的甲状腺球蛋白多克隆抗体用0.05mol/L pH9.0的碳酸盐缓冲液液稀释后，按0.1mL/孔包被到微孔板内，在4～8℃吸附24～26小时后，用0.05mol/L pH9.0的磷酸盐缓冲液洗板，再用封闭液在4～8℃封闭18～20小时，弃除多余的封闭液，经真空干燥处理后制得甲状腺球蛋白多克隆抗体包被板；

所述酶标记液为含0.5mg/L的辣根过氧化物酶标记的甲状腺球蛋白单克隆抗体、0.1～0.6mg/L的聚乙二醇-200和1～3mg/L的壳聚糖的15mmol/L pH8.0磷酸盐缓冲液。

进一步的，所述对照缓冲液为15mmol/L pH7.4的磷酸盐缓冲液。

进一步的，所述洗涤液为含0.5g/L的吐温-20的15mmol/L pH7.4的磷酸盐缓冲液。

进一步的，所述显色液为四甲基联苯胺的甲醇溶液，浓度为0.1mg/mL。

进一步的，所述终止液为3mol/L H₂SO₄溶液。

进一步的，所述底物液为pH7.4磷酸-柠檬酸缓冲液配制的3％过氧化氢溶液，并且溶液中0.1mg/L的焦磷酸二氢钠。

进一步的，所述封闭液为含3～5g/L的蔗糖、0.5～2g/L的鼠李糖脂和1.5g/L的蛋清白蛋白的20mmol/L pH9.0的磷酸盐缓冲液。