[发明专利]一种生产核黄素的工程菌株及其应用在审
| 申请号： | 201710008300.8 | 申请日： | 2017-01-05 |
| 公开（公告）号： | CN108277189A | 公开（公告）日： | 2018-07-13 |
| 发明（设计）人： | 施明安;孙向宇;G·科赛科;H·赛墨;V·梅格戴夫斯卡;M·塞瓦吉 | 申请（专利权）人： | 上海创诺医药集团有限公司;赤峰制药股份有限公司;赤峰蒙广生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12P25/00;A23L33/15;A23K20/174;C12R1/07 |
| 代理公司： | 上海一平知识产权代理有限公司 31266 | 代理人： | 马莉华;陆凤 |
| 地址： | 201203 上海市浦东新区张江*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 核黄素 工程菌株 核黄素合成基因 工程细菌 基因敲除 基因修饰 基因整合 启动子 菌株 生产 应用 生产能力 改造 表现 | ||
1.一种生产核黄素的工程菌株，其特征在于，所述菌株为芽孢杆菌(Bacillus)，并且所述菌株的基因组中整合有外源基因表达盒，所述的外源基因表达盒含有以下元件：P15启动子和核黄素操纵子基因。
2.如权利要求1所述的工程菌株，其特征在于，所述的外源基因表达盒包含第一外源基因表达盒和第二外源基因表达盒。
3.如权利要求1所述的工程菌株，其特征在于，所述的第一外源基因表达盒还含有AmyE基因元件。
4.如权利要求1所述的工程菌株，其特征在于，所述的工程菌株是经原生质体融合获得的重组子。
5.如权利要求1所述的工程菌株，其特征在于，所述菌株的基因组中外源基因(核黄素操纵子基因)的拷贝数为10-50个，较佳地为20-40个。
6.一种生产核黄素的方法，其特征在于，包括步骤：
(i)培养权利要求1所述的工程菌株，从而获得含核黄素的发酵产物；和
(ii)从所述发酵产物中分离出核黄素。
7.一种构建权利要求1所述工程菌株的方法，其特征在于，包括步骤：
(a)构建含有第一外源基因表达盒的载体，所述第一外源基因表达盒具有以下元件：AmyE基因、P15启动子和核黄素操纵子基因；
(b)构建含有第二外源基因表达盒的载体，所述第二外源基因表达盒具有以下元件：P15启动子和核黄素操纵子基因；
(c)将步骤(a)和步骤(b)获得的载体分别转入受体菌株，获得基因组整合有第一外源基因表达盒的第一重组菌株和基因组整合有第二外源基因表达盒的第二重组菌株；
(d)对第一重组菌株和第二重组菌株进行原生质体融合，获得基因组中整合有第一外源基因表达盒和第二外源基因表达盒的重组子，所述的重组子即为权利要求1所述的工程菌株。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述的受体菌株为枯草芽胞杆菌Bacillussubtilis，较佳地为Bacillus subtilis SMY。
9.一种权利要求1所述工程菌株的用途，其特征在于，所述菌株被用作发酵生产核黄素的工程菌。
10.一种制备食品组合物的方法，其特征在于，包括步骤：
将权利要求2所述方法制备的核黄素添加到食品组合物中，从而获得含有核黄素的食品组合物。
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