[发明专利]一种H2S检测试剂及其合成方法和应用

权利要求书

1.一种H₂S检测试剂，特征在于，其是(E)-4-(4-(2-(5,5-二氟-10-(4-甲氧基苯基)-1,7,9-三甲基-5H-4,5,-二吡咯并[1,2-c：2'，1'-f][1,3,2]二氮杂硼环三烯-3-基)乙烯基)苯氧基)-7-硝基苯并[c][1,2,5]恶二唑(BDP-N1)，结构式为：

2.如权利要求1所述的一种H₂S检测试剂的合成方法，其特征在于，步骤为：

1)在N₂保护下，往二氯甲烷中加入1摩尔当量的4-甲氧基苯甲醛，2摩尔当量的2,4-二甲基吡咯，搅拌条件下滴入几滴三氟乙酸，室温搅拌6-8h；然后加入1摩尔当量的溶解于二氯甲烷中的DDQ溶液，再搅拌4-5h；加入过量三乙胺，15-20min后，在0℃下，滴加过量三氟化硼乙醚溶液，然后升温至室温再搅拌6-8h反应完成。把反应液倒入水中，用二氯甲烷萃取，合并有机相，加入无水Na₂SO₄除水，然后将二氯甲烷旋转蒸发除去，然后柱色谱分离得到桔红色固体(5,5-二氟-10-(4-甲氧基苯基)-3,7,9-三甲基-5H--4,5,-二吡咯并[1,2-c：2'，1'-f]2]二氮杂硼环三烯-1-基)甲基；

2)在N₂保护下，将1摩尔当量的上一步产物、1摩尔当量的4-羟基苯甲醛，在哌啶和冰乙酸催化下在甲苯中回流4-6h，冷却至室温后旋转蒸发除去甲苯，将反应混合物用柱色谱分离得到棕红色固体(E)-4-(2-(5,5-二氟-10-(4-甲氧基苯基)-1,7,9-三甲基-5H-4,5,-二吡咯并[1,2-c：2'f][1,3,2]二氮杂硼环三烯-3-基)乙烯基)苯酚；

3)在适量乙醇中，加入1摩尔当量的上一步得到的化合物，1摩尔当量的4-氯-7-硝基苯并-2-氧杂-1,3-二唑，1.5摩尔当量的三乙胺，室温下搅拌12-14小时，然后将反应液倒入水中并用二氯甲烷萃取，用氯化钠溶液洗涤有机相，然后用无水Na₂SO₄除水，抽滤，然后将二氯甲烷旋转蒸发除去，剩余固体用柱色谱分离得到目标化合物(E)-4-(4-(2-(5,5-二氟-10-(4-甲氧基苯基)-1,7,9-三甲基-5H-4,5,-二吡咯并[1,2-c：2'，1'-f][1,3,2]二氮杂硼环三烯-3-基)乙烯基)苯氧基)-7-硝基苯并[c][1,2,5]恶二唑。

3.一种检测H₂S的方法，其特征在于，步骤为：

(1)、配制pH＝7.4、浓度为10mM的PBS缓冲溶液，配制2mM的BDP-N1的DMSO溶液；

(2)、将1600μL pH 7.4的PBS缓冲溶液、400μL DMSO溶液和5μL BDP-N1的DMSO溶液加到干净的荧光比色皿中，在荧光分光光度仪上检测，随着待测样的加入，587nm的荧光强度逐渐增强；

(3)、将1600μL pH 7.4的PBS缓冲溶液、400μL DMSO溶液和5μL BDP-N1的DMSO溶液加到另外六个荧光比色皿中，分别再加入体积为0、10、20、30、40、50μL的HS^-溶液，在荧光分光光度仪上测定587nm对应的荧光强度F为17、531、1161、1589、2155、2559，以H₂S浓度为横坐标，以荧光强度F为纵坐标绘制图，得到H₂S浓度的工作曲线；线性回归方程为：F＝51.64c-46.20，c的单位为μM；

(4)、将1600μL pH 7.4的PBS缓冲溶液、400μL DMSO溶液和5μL BDP-N1的DMSO溶液加到干净的荧光比色皿中，用微量进样器吸取VμL待测样品溶液，加入到此干净的荧光比色皿中，在荧光分光光度仪上检测，将测得的荧光强度代入步骤(3)的线性回归方程，得到浓度c，待测样品C_待测样＝2000μL×c×10^-6/VμL,即可求得H₂S的浓度。