[发明专利]一种结直肠癌早期肝转移动物模型及其构建方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于结直肠癌技术领域，尤其涉及一种结直肠癌早期肝转移动物模型及其构建方法和应用。

背景技术

目前结直肠癌肝转移瘤种植模型肠道梗阻发病率高、模型生存时间短、不能适应长时间实验、未能模拟肿瘤转移的全过程、不符合临床肝转移瘤的发生机制特征、诱导周期较长等缺陷。

发明内容

本发明的目的在于提供一种结直肠癌早期肝转移动物模型及其构建方法和应用，旨在解决目前结直肠癌肝转移瘤种植模型肠道梗阻发病率高、模型生存时间短、不能适应长时间实验的缺陷的问题。

本发明是这样实现的，一种结直肠癌早期肝转移动物模型，其特征在于，所述结直肠癌早期肝转移动物模型细胞悬液浓度为2.5×10⁷/ml，经脾注入结肠癌细胞0.1ml不等，注射时间3分钟；同时采用Vetbond 3M组织粘合剂封闭切口，将脾脏放回原位。防止切口出血及癌细胞液外溢，提高模型成活率，保证早期肝转移的模型效果，保证进一步早期肝转移转移机制的实验和临床应用研究。

本发明的另一目的在于提供一种所述结直肠癌早期肝转移动物模型的构建方法，所述构建方法包括以下步骤：

步骤一，分别选取人结直肠癌细胞株，确定细胞悬液浓度为2.5×10⁷/ml，经脾缓慢注入结肠癌细胞0.1ml不等，注射时间3分钟；

步骤二，同时采用Vetbond 3M组织粘合剂封闭切口，将脾脏放回原位。

本发明的另一目的在于提供一种利用所述结直肠癌早期肝转移动物模型的结直肠癌株多种核素摄取方法，所述结直肠癌株多种核素摄取方法包括：

选取高低不同转移能力的Lovo，HT29，SW620，SW480，L02结直肠癌细胞，进行多种核素摄取实验¹⁸F-FDG,¹⁸F-FLT,¹⁸F-FMISO；

细胞摄取率公式：％ID/10⁵＝(样本计数-本底计数)/总计数×100％/细胞计数；其中本底计数是指没有铺细胞的空孔非特异吸附计数，总计数是指每孔中加入的总的放射性计数。

进一步，所述结直肠癌株多种核素摄取方法中Lovo细胞对¹⁸F-FDG的摄取明显低于HT-29细胞，且不受总剂量的影响；而HT-29细胞随着¹⁸F-FDG剂量的增加而摄取增加，摄取率则下降，证实不同转移潜能癌细胞的体外核素摄取率存在差异。

本发明的另一目的在于提供一种利用所述结直肠癌早期肝转移动物模型的结直肠癌株及肝转移瘤生物学特性对比分析方法，所述结直肠癌株及肝转移瘤生物学特性对比分析方法采用SABC法对生物学特性指标VEGF、CD82、HIF-1α、nm23染色分析；显微镜下观察并采集图像，分析阳性表达差异，按染色强度及阳性细胞数来计算评分；测定高、低转移潜能结直肠癌细胞的分子生物学指标的变化规律；10％甲醛固定早期肝转移结节及脾原位肿瘤结节，石蜡切片，HE染色观察肝转移瘤形态，免疫组化染色测定检测生物学特性指标VEGF、HIF-1α表达量的差异。

本发明的另一目的在于提供一种利用所述结直肠癌早期肝转移动物模型的结直肠癌早期肝转移进行多种单一模态的影像检测方法，所述结直肠癌早期肝转移进行多种单一模态的影像检测方法包括：

(1)对结直肠癌肝转移的动物模型进行超声探查所用探头为L15-7io浅表探头，对肝脏异常回声记录，并测量大小后采集图像；

(2)对构建的结直肠癌肝转移裸鼠模型进行Micro CT增强扫描，Micro CT采用的造影剂为Fenestra LC，造影剂用量为0.4ml/20g，每次扫描采取的增强方式：注入造影剂后3小时进行扫描；

(3)对构建的结直肠癌肝转移裸鼠模型行磁共振肝脏横断位及冠状位扫查，扫描序列：T2WI横断面及冠状位。

本发明的另一目的在于提供一种利用所述结直肠癌早期肝转移动物模型的早期肝转移瘤发生生物学特性检测方法，所述早期肝转移瘤发生生物学特性检测方法包括：

对构建的结直肠癌肝转移裸鼠模型进行Micro PET成像；麻醉好的裸鼠模型通过尾静脉注射100μci的放射性分子探针0.2ml，俯卧位头先进的体位固定于扫描床上，于注射药物的一小时后行扫描¹⁸F-FDG，20分钟后¹⁸F-FB-NGA；均静态扫描10分钟；