[发明专利]减毒的猪瘟病毒标记活疫苗株及利用其的用于口服施用的疫苗组合物

权利要求书

1.减毒的猪瘟病毒标记活疫苗株，其特征在于，其为将猪瘟病毒疫苗株Flc-LOM-BErns进行细胞间交替连续培养而获得的减毒的猪瘟病毒标记活疫苗株，所述细胞间交替连续培养是依次在CPK细胞(克隆的猪肾细胞)、BK细胞(牛肾细胞)、PK细胞(猪肾细胞)及CPK细胞(克隆的猪肾细胞)中进行连续继代培养。

2.根据权利要求1所述的减毒的猪瘟病毒标记活疫苗株，其特征在于，所述猪瘟病毒疫苗株Flc-LOM-BErns是以保藏编号KCTC12304BP进行保藏的疫苗株。

3.根据权利要求1所述的减毒的猪瘟病毒标记活疫苗株，其特征在于，所述标记活疫苗株具有1×10^6.0～1×10^7.0TCID₅₀/ml的效价。

4.根据权利要求1所述的减毒的猪瘟病毒标记活疫苗株，其特征在于，所述标记活疫苗株是以保藏编号KCTC18431P进行保藏的疫苗株。

5.用于口服施用的猪瘟病毒疫苗组合物，其包含权利要求1至权利要求4中任意一项所述的减毒的猪瘟病毒标记活疫苗株及药剂学上可接受的载体。

6.根据权利要求5所述的用于口服施用的猪瘟病毒疫苗组合物，其特征在于，所述组合物剂型化为诱饵剂型。

7.制备减毒的猪瘟病毒标记活疫苗株的方法，其包括下述步骤：

(a)将Flc-LOM-BErns疫苗株接种于CPK细胞(克隆的猪肾细胞)中，然后进行连续继代培养，以增殖至具有1×10^3.0～1×10^4.0TCID₅₀/ml的效价；

(b)将所述步骤(a)中增殖的病毒再次接种于BK细胞(牛肾细胞)中，然后进行连续继代培养，以增殖至具有1×10^4.0～1×10^5.0TCID₅₀/ml的效价；

(c)将所述步骤(b)中增殖的病毒再次接种于PK细胞(猪肾细胞)中，然后进行连续继代培养，以增殖至具有1×10^5.0～1×10^6.0TCID₅₀/ml的效价；以及

(d)将所述步骤(c)中增殖的病毒再次接种于CPK细胞(克隆的猪肾细胞)中，然后进行连续继代培养，以增殖至具有1×10^6.0～1×10^7.0TCID₅₀/ml的效价。

8.根据权利要求7所述的制备减毒的猪瘟病毒标记活疫苗株的方法，其特征在于，实施各个所述步骤(a)～(d)之前，进一步包括确认及去除混入的菌、混入的病毒或它们的混合物的步骤。

9.根据权利要求8所述的制备减毒的猪瘟病毒标记活疫苗株的方法，其特征在于，所述混入的菌为支原菌，所述混入的病毒为犬副流感病毒。

10.根据权利要求7所述的制备减毒的猪瘟病毒标记疫活苗株的方法，其特征在于，所述步骤(a)的Flc-LOM-BErns疫苗株是以保藏编号KCTC12304BP进行保藏的疫苗株。

11.根据权利要求7所述的制备减毒的猪瘟病毒标记活疫苗株的方法，其特征在于，所述步骤(a)的连续继代培养至少进行至增殖20代，所述步骤(b)的连续继代培养至少进行至进一步增殖10代，所述步骤(c)的连续继代培养至少进行至进一步增殖10代，所述步骤(d)的连续继代培养至少进行至进一步增殖10代。

12.根据权利要求7所述的制备减毒的猪瘟病毒标记活疫苗株的方法，其特征在于，所述标记活疫苗株是以保藏编号KCTC18431P进行保藏的疫苗株。