[发明专利]细胞的早期转染后分离(EPIC)用于生物制品产生

权利要求书

1.一种产生表达靶多肽的生产者细胞的群体的方法，所述方法包括：

(a)用编码一个或多个mRNA的一个或多个载体转染宿主细胞，其中所述一个或多个mRNA编码可选多肽和所述靶多肽；

(b)在转染的2至5天内，从所述转染的宿主细胞分离表达所述可选多肽的早期表达转染的宿主细胞的亚群，其中所述分离对于所述可选多肽采用磁性激活的细胞分选(MACS)或荧光激活的细胞分选(FACS)；和

(c)扩大所述早期表达转染的宿主细胞的分离的亚群，由此产生表达所述靶多肽的生产者细胞的群体，

其中所述生产者细胞的群体与所述转染的宿主细胞的未选择的群体相比表达增强水平的所述靶多肽，和

其中步骤(b)和(c)各自在无药物选择培养基中进行。

2.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括从所述生产者细胞的群体中分离所述靶多肽。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其进一步包括从扩大的亚群中分离一个或多个单一转染的宿主细胞，和培养所述一个或多个单一转染的宿主细胞以产生一个或多个单一转染的宿主细胞的克隆群体。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，与在步骤(c)中获得的表达所述靶多肽的转染但未克隆的宿主细胞的稳定的汇集物相比，所述一个或多个单一转染的宿主细胞的克隆群体的至少一个在靶多肽产生中得到2-30倍的改善。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中，在步骤(b)中经过选择的转染的宿主细胞含有至少80-120x10⁶个细胞。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中，所述步骤(b)中的分离在转染后2-4天进行。

7.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中，所述步骤(b)中的分离在转染后2天进行。

8.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中，所述步骤(b)中的分离在转染后3天进行。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中，在步骤(c)中的扩大之前，所述转染的宿主细胞的亚群含有0.5-6.0x10⁶个细胞。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中，所述步骤(c)中的扩大进行4-31天。

11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中，所述一个或多个载体的第一个编码mRNA，所述mRNA编码所述靶多肽，并且所述一个或多个载体的第二个编码mRNA，所述mRNA编码所述可选多肽。

12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中，所述编码所述靶多肽的mRNA和所述编码所述可选多肽的mRNA两者均在一个载体上编码。

13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述可选多肽是FACS可选多肽，并且所述步骤(b)中的分离采用FACS。

14.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述靶多肽和所述可选多肽形成融合多肽。

15.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中，所述靶多肽和所述可选多肽由单一多顺反子mRNA编码。

16.根据权利要求15所述的方法，其中，所述多顺反子mRNA包含编码所述可选多肽的第一开放读码框(ORF)，和编码所述靶多肽的第二ORF，其中，所述第一ORF位于所述第二ORF的5’。

17.根据权利要求16所述的方法，其中，所述第一ORF具有非AUG起始密码子。