[发明专利]用于脂质体制剂的对乙氧基核酸

说明书

本文提供包含至少一个对乙氧基主链键联但不超过80％对乙氧基主链键联的治疗性寡核苷酸。本文提供用于包含脂质体的治疗性寡核苷酸的改进的递送系统，所述脂质体包含中性磷脂和包埋在所述脂质体中的对乙氧基寡核苷酸。

本申请要求2015年10月14日提交的美国临时申请号62/241,503的优先权权益，所述临时申请的全部内容以引用的方式并入本文。

发明背景

1.发明领域

本发明总体上涉及医学领域。更具体地说，它涉及对乙氧基寡核苷酸的脂质体制剂以及在医学中制备和使用此类制剂的方法。

2.相关技术说明

与靶mRNA的特定区域互补的反义寡核苷酸(寡核苷酸(oligos))已被用于抑制内源基因的表达。当反义寡核苷酸结合至靶mRNA时，形成DNA-RNA杂合体。所述杂合体形成抑制mRNA的翻译并因此抑制编码的蛋白质的表达。如果蛋白质对细胞的存活至关重要，则其表达的抑制可导致细胞死亡。因此，反义寡核苷酸可以是抗癌和抗病毒治疗中的有用工具。

使用反义寡核苷酸来抑制基因表达的主要障碍是细胞不稳定性、低细胞摄取和不良细胞间递送。天然磷酸二酯不耐核酸酶水解；因此在观察到任何抑制作用之前需要高浓度的反义寡核苷酸。已经制备了修饰的磷酸二酯类似物如对乙氧基来克服这种核酸酶水解问题，但是它们没有提供对所述问题的令人满意的解决方案。

反义寡核苷酸的细胞摄取较低。为了解决这个问题，已经使用物理技术如磷酸钙沉淀、DEAE-葡聚糖介导或电穿孔来增加寡核苷酸的细胞摄取。这些技术难以再现并且不适用于体内。阳离子脂质如Lipofectin也已用于递送寡核苷酸。静电相互作用在阳离子脂质与带负电荷的寡核苷酸之间形成，这产生然后被靶细胞吸收的复合物。因为这些阳离子脂质不保护寡核苷酸免受核酸酶消化，所以对细胞膜有害，并且它们仅适用于递送耐核酸酶的硫代磷酸酯，而不适用于递送核酸酶可裂解的磷酸二酯。

已经制备的另一种修饰的磷酸二酯(PD)类似物是对乙氧基(pE)寡核苷酸。pE寡核苷酸的修饰在磷酸酯主链中进行，以使得所述修饰不会干扰这些寡核苷酸与靶mRNA的结合。pE寡核苷酸通过向磷酸酯主链的非桥氧原子添加乙基来制备，从而使这些寡核苷酸成为不带电的化合物。尽管它们对核酸酶具有抗性，但pE寡核苷酸的细胞摄取和细胞内递送较差，因为在内化后，这些寡核苷酸保持在内体/溶酶体液泡内部螯合，从而阻碍它们接近靶mRNA。

需要用于治疗疾病的改进的反义组合物，并且还需要用于制备此类改进的组合物的方法。

发明概述