[发明专利]使用聚酰亚胺多孔质膜的细胞的大量培养方法、装置及试剂盒

说明书

本发明涉及大量的细胞的培养方法、细胞培养装置及试剂盒。另外，本发明涉及使用载体的连续型细胞培养装置及连续型细胞培养方法。

【技术领域】

本发明涉及大量的细胞的培养方法、细胞培养装置及试剂盒。

【背景技术】

【细胞培养】

细胞在生物体内一般作为取三维结构的集团存在。一方面，在人工环境中培养细胞时，一般使用细胞在培养容器底面以单层状的形二维培养的古典的平面培养法，或在使细胞在液体培养液中分散的状态下培养的悬浮培养法。对于在平面培养法中使用的细胞适宜是粘接性比较高的细胞，但在使用适宜的细胞时，由培养环境的差异，细胞的性质有时大变化。对于悬浮培养法也存在适宜的细胞和不适宜的细胞。

疫苗、酶、激素、抗体、细胞因子等在医疗用途中使用的生物体内蛋白质等的需要上升，使用细胞培养的生物体内蛋白质等的大量产生受到关注。另外，伴随在再生医疗中的细胞移植等受到关注，效率并且简便地培养大量的细胞的方法论受到关注。

对于大肠杆菌等的悬浮细胞，在大型培养槽大量培养的技术得到研究。在使用大型培养槽的悬浮细胞的大量培养中，大量的培养液和搅拌装置变得必要。一方面，使用附着细胞而进行物质产生研究也随着使用的细胞的研究的进展而集合了较多的关注。当要大量培养附着细胞时，在经典的平面培养法中，由于细胞仅二维地展开，多的培养面积变得必要。

作为用立体环境培养大量的细胞的方法，也报告有使用生物反应器或细胞培养载体的方法(非专利文献1、专利文献1)。作为使用生物反应器的方法，有在柱内蓄积玻璃纤维等的纤维状物质，在该空间继续培养细胞而产生物质的方法(专利文献2)。另外，作为代表性的细胞培养用载体，作为可附着培育细胞的小粒子的微载体成为广泛的研究对象(专利文献3、4)。

如在专利文献4中以病毒产生作为例示，为了由使用微载体的细胞培养法增加产生物的量而升高效率，达成高密度的细胞培养成为最重要的课题。另外，如何效率并且简便地使细胞增殖，可在作为载体的微载体上移植－接种细胞也成为重要的课题。关于这方面，在使用微载体的细胞培养系中，为了微载体不互相凝集，有充分地搅拌－扩散的必要。从而，由于需要仅能将使微载体分散的培养液充分地搅拌－扩散的容积，在可培养的细胞的密度上有上限。再者，为了分离微载体和培养液，有用可区分细的粒子的滤器分离的必要的等，在量及效率上尚还有课题。

作为与微载体培养不同的方法，也发现通过使用甲基纤维素或胶凝糖胶的3维培养法继续大量培养球形形状的细胞的方法(非专利文献2、3)，但在作为限于球形的方法之上，仔细核对培养状况而使球形小粒块化的等，烦琐的作业变得必要。

在向简便并且自动化的过程中，需要可培养大量的数的细胞的细胞培养法的开拓和构建。

作为使用载体培养附着性细胞的系统，使用中空丝培养或纤维素立方体等的生物反应器或微载体培养法被广泛开发。作为古典方法论，如专利文献5所示，是指通过向细胞和培养载体的集合体连续供给通入5％CO₂含有空气的培养基，可达成继续的培养。但是，在这样的方法中有装置变复杂化的难点。一方面，在实际的生产现场中，作为细胞培养载体最多用微载体(例如非专利文献4)。使此微载体与培养基供给系统组合使用，进行持续的培养的方法继续得到研究(专利文献6、7及非专利文献5)。但是，在使用微载体的方法中，装置复杂化的例子多，另外，例如与生物体的系统比较，有无法使培养效率充分地提高的课题。在专利文献8中示被认为更有效率的方法论的想法，但未示实际进行培养的具体例，另外，也未示对于该方法论适宜的具体的原料。希望更简便并且有效的连续型细胞培养装置的确立。

【聚酰亚胺多孔质膜】

聚酰亚胺是重复单位中含酰亚胺键的高分子的总称。芳香族聚酰亚胺是指芳香族化合物直接以酰亚胺键连接的高分子。由于芳香族聚酰亚胺是芳香族和芳香族经酰亚胺键而具有共价结构，从而具有刚直且强固的分子结构，并且，由于酰亚胺键具有强的分子间力，从而有非常高的水平的热的、机械的、化学性质。