[发明专利]一种基于宿主细胞靶点的抗乙肝模型建立及应用

说明书

本发明涉及以血红素加氧酶‑1为靶点，将人血红素加氧酶‑1基因和乙肝病毒蛋白基因通过载体转入肝细胞表达，实现同时靶向血红素加氧酶‑1及其与乙肝病毒蛋白互作的抗乙肝病毒药物评价模型的构建程序及评价方法，特别是一种以宿主细胞成分为靶点，产生特异性高、相关性强的抗乙肝体外模型及其在肝炎发病机制研究、药物治疗和创新药物研发中的应用。

技术领域

本发明涉及一种抗乙型肝炎病毒药物评价模型的建立方法，特别是一种针对宿主细胞靶点的体外模型及其操作程序，产生特异性的抗乙型肝炎病毒的分子模型及其在乙型肝炎发病机制研究、药物治疗和创新药物研发中的应用。

背景技术

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)引起的一种危害极大的世界性流行的传染病，目前全世界约有3.5亿HBV携带者，而中国是HBV高感染地区，HBV携带者占总人口比例高达10％，其中慢性乙肝患者约3000万例，每年约有35万人死于慢性乙肝相关疾病。尽管国内外研制的一些抗乙肝药物可一定程度抑制病毒复制、控制病情发展，但其疗效距离清除病毒感染、治愈绝大多数乙肝患者及病毒携带者的目标尚有很长距离。乙肝及其相关疾病仍是中国的重要公共卫生问题。因此，深入研究抗乙肝创新药物仍是当务之急。HBV是一种严格的细胞内寄生物，在它整个生活周期中，必须依靠宿主细胞蛋白来完成它的复制。故宿主细胞为抗HBV药物研究提供了大量潜在靶点。在抗病毒药物研究中，以宿主细胞成分作为抗病毒作用靶点已有报道，有些药物已进入临床，如利巴韦林具有抑制肌苷单磷酸脱氢酶的作用，已批准用于RSV感染。显然，从宿主细胞发现抗HBV靶点是解决抗HBV药物发展瓶颈的重要途径之一。

血红素加氧酶(Heme oxygenase，HO)是体内催化血红素分解代谢的限速酶，有三种同功酶：HO-1、HO-2和HO-3。HO-1属诱导型，主要分布在哺乳动物肝、脾、肺等多种脏器，具有调节和保护功能。HO-1除存在于细胞微粒体外，也存在于细胞核中，能被各种引起细胞氧化应激的损伤因素所诱导，提示HO-1也可能起着信号表达分子的作用。近年研究显示，HO-1的作用已远超出其降解血红素这一功能，HO-1及其分解代谢产物参与了维持细胞自我平衡，并通过抗氧化损伤、减轻炎症反应、抑制细胞凋亡和调节细胞增殖，对保护多种组织起重要作用。HO-1超量表达或活性增强对组织损伤的保护效应和各种慢性疾病的改善作用，表明HO系统在相关疾病临床治疗和药物研发中具有重要意义。

HO-1诱导或超表达除了显示其显著的抗凋亡、抗炎和抗纤维化等保肝作用外，最令人振奋的发现是其显著的抗病毒作用，尤其是具有显著的直接抗HBV复制效应，其在慢性病毒性肝炎中的应用前景受到前所未有的关注。HO-1完全可能成为抗HBV及减轻HBV引起肝损伤的新选择。鉴于HBV感染至今尚无根治的药物和方法，且缺乏特异性靶点和可靠的分子模型。因此，要研制理想的抗乙肝创新药物，亟须探索新的抗HBV靶点，建立新的评价体系。HO-1作为HBV感染宿主细胞——肝细胞的一种诱导型蛋白，其诱导表达除了显示其明确的保肝作用外，还具有显著的直接抗HBV作用，提示HO-1可能是抗乙肝药物评价的潜在靶点。因此，建立靶向HO-1的药物评价模型，对从宿主细胞角度研发创新药物、建立抗乙肝防治策略具有重要意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种以血红素加氧酶-1(HO-1)为靶点的抗乙肝病毒评价模型，该模型特异性高、相关性强，为乙肝发病机制研究和创新药物评价提供一种体外可靠模型。为此，本发明采取以下技术方案：