[发明专利]艾曲波帕中间体Ⅰ有关物质的检测方法

说明书

本发明名称为艾曲波帕中间体Ⅰ有关物质的检测方法，属于药物分析技术领域。本发明分别采用以苯基和十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以磷酸盐缓冲液和乙腈或磷酸乙腈溶液为流动相，采用梯度洗脱方式，所建立的2种高效液相分析方法能够分别有效测定艾曲波帕合成中间体Ⅰ2'‑羟基‑3'‑氨基‑联二苯‑3‑羧酸和中间体Ⅱ2‑(3,4‑二甲基‑苯基)‑5‑甲基‑2,4‑二氢‑吡唑‑3‑酮及上述中间体相关杂质的含量，方法专属性好、灵敏度高、操作方便，为艾曲波帕终产品的质量控制提供了有效保障。本发明还公开了一种新的杂质对照品化合物。

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种测定用于合成艾曲波帕的中间体Ⅰ2'-羟基-3'-氨基-联二苯-3-羧酸和中间体Ⅱ2-(3,4-二甲基-苯基)-5-甲基-2,4-二氢-吡唑-3-酮相关杂质的含量的药物分析方法。

本发明还涉及用于艾曲波帕中间体II的分析方法中的一种新的杂质对照品化合物DH。

背景技术

艾曲波帕，化学名为3'-{(2Z)-2-[1-(3,4-二甲基苯基)-3-甲基-5-氧代-1,5-二氢-4H-吡唑 -4-亚基]肼基}-2'-羟基联苯基-3-羧酸二乙醇胺，分子式为C₂₅H₂₂N₄O₄·2C₂H₇NO，分子量为 564.63，其结构式如下：

艾曲波帕是口服血小板生成因子类药物，该化合物可与跨膜区的血小板生成素受体相互作用，产生信号级联放大作用，进而诱导骨髓巨核细胞的增殖与分化。艾曲波帕由葛兰素史克公司率先开发，于2008年11月获得美国食品药品监督管理局(FDA)批准在美国的上市，商品名为Promacta，用于治疗糖皮质激素类药物、免疫球蛋白治疗无效或脾切除术后慢性特发性血小板减少性紫癜患者的血小板减少，是疗效显著的小分子血小板生成素受体激动剂。

艾曲波帕的合成路线在专利WO2010114943、WO2013072921、US20150087845A1等诸多文献中均有报道。尽管工艺参数有所不同，但合成路线基本一致，即通过2'-羟基-3'-氨基 -联二苯-3-羧酸(中间体Ⅰ)和2-(3,4-二甲基-苯基)-5-甲基-2,4-二氢-吡唑-3-酮(中间体Ⅱ)和两个中间体之间的缩合偶联反应进行制备。

中间体质量控制对于反应监测和收率提高有着重要作用，同时也影响着终产品的质量。目前为止，相关文献和专利均无艾曲波帕中间体分析方法的报道，而全面系统地从起始原料到终产品特别是对合成过程中的关键中间体进行质量控制，对于艾曲波帕的质量研究与合成工艺的改进具有重要的指导意义。

根据艾曲波帕中间体Ⅰ和中间体Ⅱ合成路线，其在制备及贮藏过程中能够产生的杂质包括原材料、中间产物以及位置异构体、脱甲基产物、二聚体等副产物。为完善中间过程控制，有效分析药品质量，保证用药安全，需要开发出一种便捷、有效检测艾曲波帕中间体有关物质的分析方法。

发明内容

本发明第一方面提供一种高效液相色谱法分析测定艾曲波帕中间体Ⅰ即2'-羟基-3'-氨基-联二苯-3-羧酸相关杂质含量的方法。

通过对中间体Ⅰ及其已知杂质的结构分析，针对化合物分子量普遍较小、均具备苯环结构、存在位置异构等情况，首先选择具有空间位阻特性且对于芳香族化合物具有独特的保留效果的苯基硅烷键合硅胶为填充剂。另外，根据化合物官能团解离特点，采用pH值为3.0～4.0的磷酸盐缓冲液为流动相A，磷酸乙腈溶液为流动相B，在梯度变化过程中改变流动相体系的pH值，使同时具备氨基和羧基的杂质均能呈现出良好的色谱保留行为和分离效果。

具体地，本发明所述分析方法可按照如下方式实现：

(1)样品配制