[发明专利]一种测定大鼠姜黄素血浆浓度的UHPLC‑MS/MS分析方法

说明书

技术领域

本发明属于药物动力学分析技术领域。更具体地，涉及一种测定大鼠姜黄素血浆浓度的UHPLC-MS/MS分析方法。

背景技术

姜黄素是从姜科、天南星科中的一些植物的根茎中提取的一种酚类色素，其中，姜黄约含3%～6%，是植物界很稀少的具有二酮的色素，为二酮类化合物。姜黄素为橙黄色结晶粉末，味稍苦，不溶于水。姜黄素具有降血脂、抗肿瘤、抗炎、利胆、抗氧化等作用，是一种具有良好应用前景的抗癌新药。

药代动力学评估是定量研究药物在生物体内吸收、分布、代谢和排泄规律，并运用数学原理和方法阐述血药浓度随时间变化的规律。随着药物化学的发展及人类健康水平的不断提高，对药物的药代动力学性质的要求越来越高：判断一个药物的应用前景特别是市场前景，不单纯是疗效强，毒副作用小；更要具备良好的药代动力学性质。而药物在血浆中浓度的检测技术是药代动力学分析评估的重要前提技术。

目前，姜黄素血浆浓度的常用测定方法为：精密称取姜黄素标准品适量，加入1%羧甲基纤维素钠溶液制得混悬液。取大鼠血浆置于肝素化的离心管中，5000r／min离心10min，吸取上清液置于另一离心管中，贮存于-20℃冰箱，备用。分别精密吸取0.2ml血浆样品，加入0.5ml乙酸乙酯／氯仿（1:1），涡旋混匀即行萃取，12000r／min离心5min，离心后取上清液转移至另一离心管中；再次加入0.5ml乙酸乙酯／氯仿（1:1），重新萃取1次，合并上清液，真空干燥，残渣加200μL甲醇溶解，过滤，取20μL进样。高效液相色谱（HPLC）色谱条件：流动相，乙腈-水（含1%乙酸）=45:55；姜黄素：乙腈-水（含1%乙酸）=70:30；姜黄素检测波长：420nm；流速1.0mL/min；柱温：30℃；进样体积：20μL；在上述色谱条件下进行测定。该现有技术存在如下缺点：利用HPLC进行大鼠姜黄素血浆浓度测定操作繁琐，进样时间长，定量下限不能满足检测要求等。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服上述现有技术的缺陷和不足，提供一种利用超高效液相色谱-质谱联用技术进行的姜黄素血浆浓度的UHPLC-MS/MS分析方法，对姜黄素及其相关制剂在大鼠血浆内的浓度进行准确测定，得到相应的姜黄素色谱图和离子质谱图，根据分析方法得到数据进行姜黄素的药动学、生物等效性等一系列研究，能达到准确有效地测定大鼠姜黄素血浆浓度的目的。

本发明的目的是提供一种测定大鼠姜黄素血浆浓度的UHPLC-MS/MS分析方法。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

一种测定大鼠姜黄素血浆浓度的UHPLC-MS/MS分析方法，包括如下步骤：

（1）配制姜黄素标准溶液、内标替硝唑标准溶液，建立标准曲线；

（2）待测血浆中加入内标后，进行前处理，进行LC-MS/MS分析，利用标准曲线计算出待测血浆中姜黄素的浓度。

具体优选地，所述测定大鼠姜黄素血浆浓度的UHPLC-MS/MS分析方法，包括如下步骤：

S1.建立标准曲线

S11.配制标准溶液：

精密称取姜黄素对照品，溶解于乙腈溶液中震荡摇匀，得1mg/mL的标准储备液，再用甲醇/水=1/1稀释液溶液梯度稀释，得一系列浓度的姜黄素标准溶液；

精密称取替硝唑（Tinidazole）标准品，溶解于90%甲醇水溶液中震荡摇匀，得1mg/mL的母液，再用90%甲醇水溶液稀释成0.2 µg/mL标准溶液；

S12.建立标准曲线

分别取一系列浓度的姜黄素标准溶液，分别加入空白血浆，震荡后，加入内标替硝唑标准溶液，进行样品前处理后，进行UHPLC-MS/MS分析，以不同浓度的姜黄素的峰面积与内标替硝唑的峰面积之比Y 为纵坐标，以姜黄素的血药浓度C为横坐标进行直线回归，建立标准曲线；

S2.样品检测：待测样品前处理后，进行UHPLC-MS/MS分析。

优选地，上文所述前处理的方法为（包括上述步骤（1）、步骤S12和S2中所述前处理）：样品加入内标后，旋涡混匀，加入3～5倍体积的乙酸乙酯，旋涡振荡，静置2～5min后，离心取有机层，室温真空挥干，加入乙腈-醋酸铵溶液溶解，离心取上清，即为供试品溶液，用于UHPLC-MS/MS进样分析。

前处理方法中，优选地，所述样品和内标的体积比为8～12：1（优选10：1）。

优选地，所述旋涡混匀的时间为5～20s（优选60s）。

优选地，所述旋涡振荡的时间为30～90s（优选60s）。