[发明专利]检测CK-MB的时间分辨荧光免疫层析试纸条、试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种检测CK‑MB的时间分辨免疫层析试纸条、试剂盒及其制备方法，所述试纸条包括底衬、以及依次设在所述底衬上的样品垫、结合垫、包被膜和吸水纸，所述结合垫上包被有荧光微球标记的CK‑MB单克隆检测抗体，所述包被膜包括平行设置、且相互间隔的检测区和对照区，所述检测区包被有识别单一抗原表位的CK‑MB单克隆捕获抗体，所述对照区包被有羊抗鼠IgG抗体；所述包被膜为结合有聚合物的硝酸纤维膜，所述聚合物为在小于450nm波长具有10％以下透光率，在500nm波长以上具有95％以上的透光率的材料。本发明的试纸条，可以快速定量检测，试验结果准确可靠，灵敏度高，制备方法简单，适合大规模生产，对CK‑MB定量检测有积极意义。

技术领域

本发明属于医学检验技术领域，具体地说，本发明涉及一种定量检测CK-MB的时间分辨荧光免疫层析试纸条、试剂盒及其制备方法。

背景技术

肌酸激酶(Creatine Kinase,CK)通常存在于动物的心脏、肌肉以及脑等组织的细胞浆和线粒体中，是一个与细胞内能量运转、肌肉收缩、ATP再生有直接关系的重要激酶，它可逆地催化肌酸与ATP之间的转磷酰基反应。肌酸激酶同工酶(CK-MB)主要分布于心肌中。当心肌损伤后，CK-MB释放到血液中，3～8h后开始升高，可持续3～5天。肌钙蛋白，肌红蛋白，肌酸激酶同工酶这三项联合检测能尽早检测出心肌是否受损。肌酸激酶同功酶在临床诊断中有十分重要的意义，在各种病变包括肌肉萎缩和心肌梗塞发生时，人的血清中肌酸激酶水平迅速提高，目前认为在心肌梗塞的诊断中测定肌酸激酶的活性比做心电图更为可靠。心肌梗死时，肌酸激酶在起病6小时内升高，24小时达高峰，3-4日内恢复正常，其中肌酸激酶的同工酶CK-MB诊断的特异性最高。肌酸激酶因其具有重要的生理功能和临床应用价值已引起人们广泛的重视和深入的研究。

心肌型肌酸激酶同功酶的测定主要采用双抗体夹心的免疫学方法，检测方法则包括:

1、双抗夹心免疫化学发光法——该法操作简便，特异性强，敏感性高。

2、金标法——该法具有快速简便，易观察的特点。但是定性检测，灵敏度不高。

3、透射免疫浊度法——该测定方法简便、快速，可自动化，适合于批量检测，但是免疫透射比浊的方法学及临床应用尚需做进一步的验证。

时间分辨免疫层析POCT最主要特点是强调出结果快速，大大缩短了实验结果周转时间。对于急诊治疗和抢救的病人，这些病人往往情况危急且病因不明，而传统的临床检验室测量时间一般要15分钟以上，POCT一般在5分钟以内即可完成测试，医生根据POCT提供的信息，对病人及时作出初步诊断并拟定救治方案，必将减少住院时间，降低发病率/死亡率，产生很大的社会效益和经济效益。同时对于一些需要长期监控的慢性病，如糖尿病的病人可以方便地按照医生的要求由病人自己或家属进行血糖和尿糖的监控。

目前POCT无可靠的质量保证。POCT每一个测试单元都是独立的，因此无法保证每个测试单元质量都是一样。其中光学法检测的仪器会受到标本中溶血和乳糜的干扰，化学发光法会受到外源性氧化还原物质的影响。基于免疫层析，色谱和干化学技术的各种试纸条和仪器都会因温度，湿度和pH值的不同影响基质中微蛋白的活性，进而影响结果。部分POCT仪器方法学的缺陷，灵敏性和重复性欠佳，线性范围窄，只是急诊或者急求时用于参考，必要时还需送到检验科进行复查。

目前采用的免疫荧光层析装置采用反射法检测多孔膜上的荧光信号，荧光检测仪捕捉到的是多孔膜表面荧光染料修饰的特异性抗体，而检测不到多孔膜内部的荧光信号，导致检测灵敏度下降。

发明内容

基于此，为了克服上述现有技术的缺陷，本发明提供了一种定量检测CK-MB的时间分辨免疫层析试纸条、试剂盒及其制备方法，该免疫层析试纸条和试剂盒不仅能够提供较高的灵敏度和特异性，操作简单，满足临床快速检验的需要，而且降低了成本，满足国内市场的需求。

为了实现上述发明目的，本发明采取了以下技术方案：