[发明专利]一种长果安息香DNA提取方法

权利要求书

1.一种长果安息香DNA提取方法，其特征在于，所述DNA提取方法包括：

S01：称取长果安息香放入研钵中，向所述研钵中加入液氮，研磨成粉末，将所述粉末放入离心管中；

S02：向所述离心管中加入体积比为50:1的2×CTAB缓冲液和β-巯基乙醇，混合均匀后形成混合液a；

S03：将所述混合液a放入65℃水浴中温育40-60min，温育后的所述混合液a离心，离心得到的上清液a备用；

S04：根据体积比为10:1混合所述上清液a和NaCl溶液，搅拌均匀后得到混合液b；

S05：根据体积比为1:1混合所述混合液b和溶剂，混匀形成混合液c，所述混合液c离心后留取上清液b，所述溶剂为氯仿与异戊醇的混合溶液；

S06：重复步骤S04-S05，直到无沉淀物，最后一次离心得到的上清液c备用；

S07：向所述上清液c中加入异丙醇，轻轻晃动至絮状物出现，离心，离心得到的沉淀物a备用；

S08：将所述沉淀物a用浓度为75％的酒精洗涤，离心，离心得到的沉淀物b备用；

S09：重复1-2次步骤S07-S08，最后一次离心得到的沉淀物c备用；

S10：向所述沉淀物c中加入体积比为100:1的灭菌NaCl溶液和RNaseA溶液，混合均匀后置于37℃水浴中消化12-15h，得到混合液d；

S11：根据体积比为1:1混合所述混合液d和冰无水乙醇，慢慢水平转动离心管至产生絮状沉淀，离心，离心得到的沉淀物d备用；

S12：将所述沉淀物d放入离心管中，用浓度为75％的酒精洗涤10min，洗涤完毕后将酒精倒出，留取所述沉淀物d；

S13：向所述离心管中加入无水乙醇，洗涤，洗涤完毕后将酒精倒出，留取所述沉淀物d；

S14：将所述离心管倒置于干燥的灭菌滤纸上，室温干燥至所述沉淀物d透明；

S15：向干燥后的所述沉淀物d中加入TE缓冲液进行溶解，溶解后离心，离心得到的上清液d为长果安息香的DNA溶液。

2.根据权利要求1所述的长果安息香DNA提取方法，其特征在于，步骤S01中所述2×CTAB缓冲液为65℃预热的2×CTAB缓冲液。

3.根据权利要求1所述的长果安息香DNA提取方法，其特征在于，步骤S03中所述温育为将所述混合液a放入65℃水浴中40-60min，且每隔5min摇匀一次。

4.根据权利要求1所述的长果安息香DNA提取方法，其特征在于，步骤S04中所述NaCl溶液的浓度为5mol/L，步骤S10中所述NaCl溶液的浓度为1mol/L。

5.根据权利要求1所述的长果安息香DNA提取方法，其特征在于，步骤S05中所述溶剂为体积比是24:1的氯仿与异戊醇的混合溶液。

6.根据权利要求1所述的长果安息香DNA提取方法，其特征在于，步骤S07中所述异丙醇的加入量为离心管体积的2/3-3/2倍。

7.根据权利要求1所述的长果安息香DNA提取方法，其特征在于，所述DNA提取方法还包括，在步骤S07中若没有絮状物产生，则将已加入异丙醇的所述上清液c置于冰箱内5-10min。

8.根据权利要求1所述的长果安息香DNA提取方法，其特征在于，步骤S15中所述TE缓冲液包括浓度为10mmol/L、pH为8.0的Tris-HCl和浓度为1mmol/L、pH为8.0的EDTA。

9.根据权利要求1所述的长果安息香DNA提取方法，其特征在于，步骤S03中所述离心条件为：转速3000-5000rpm，时间5-15min；步骤S05和S06中所述离心条件为：转速10000-14000rpm，时间10-20min。

10.根据权利要求1所述的长果安息香DNA提取方法，其特征在于，步骤S07、S08、S09、S11和S15中的所述离心条件为：转速3000-5000rpm，时间5-15min，温度4℃。