[发明专利]一种凝血酶的检测方法有效
| 申请号： | 201611178768.3 | 申请日： | 2016-12-19 |
| 公开（公告）号： | CN106770163B | 公开（公告）日： | 2019-10-25 |
| 发明（设计）人： | 薛彬;常钰磊;张友林;刘晓敏;涂浪平;孔祥贵 | 申请（专利权）人： | 中国科学院长春光学精密机械与物理研究所 |
| 主分类号： | G01N21/65 | 分类号： | G01N21/65;G01N1/28 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 赵青朵 |
| 地址： | 130033 吉林省长春*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 核酸适配子 检测 凝血酶 上转换纳米粒子 三角片 银纳米 分析化学领域 拉曼光谱检测 待检测样品 核苷酸序列 检测灵敏度 特异性结合 背景荧光 溶液混合 | ||
1.一种检测凝血酶的组合物，其特征在于，包括标记有核酸适配子的银纳米三角片和标记有核酸适配子的上转换纳米粒子；所述银纳米三角片上标记的核酸适配子和上转换纳米粒子上标记的核酸适配子为与凝血酶特异性结合的核苷酸序列；所述银纳米三角片上标记的核酸适配子为5’端带有巯基的与凝血酶特异性结合的核苷酸序列；所述上转换纳米粒子上标记的核酸适配子为5’端带有羧基的与凝血酶特异性结合的核苷酸序列；所述银纳米三角片上标记的核酸适配子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述上转换纳米粒子上标记的核酸适配子的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述标记有核酸适配子的银纳米三角片的制备方法为将银纳米三角片与核酸适配子溶液混合过夜后离心，将离心后的沉淀分散于Tris缓冲溶液中。
3.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，所述标记有核酸适配子的上转换纳米粒子的制备方法为上转换纳米粒子去配体后与核酸适配子溶液混合后离心，将离心后的沉淀分散于Tris缓冲溶液。
4.一种凝血酶的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
1)将标记有核酸适配子的银纳米三角片溶液与标记有核酸适配子的上转换纳米粒子溶液混合均匀，得检测体系；
2)在所述检测体系中加入待检测样品，进行拉曼光谱检测；
所述银纳米三角片上标记的核酸适配子为5’端带有巯基的与凝血酶特异性结合的核苷酸序列；所述上转换纳米粒子上标记的核酸适配子为5’端带有羧基的与凝血酶特异性结合的核苷酸序列；所述银纳米三角片上标记的核酸适配子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述上转换纳米粒子上标记的核酸适配子的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；
所述标记有核酸适配子的银纳米三角片与所述标记有核酸适配子的上转换纳米粒子的摩尔比为1:10～1:100；所述拉曼光谱的激发激光为波长为700～1000nm的近红外光，发射光为700～1000nm的近红外光。
5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述标记有核酸适配子的银纳米三角片与所述标记有核酸适配子的上转换纳米粒子的摩尔比为1:20。
6.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述近红外光谱的激发激光为波长为980nm的近红外光，发射光为808nm的近红外光。
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