[发明专利]一种岩藻多糖在制备PC‑12细胞或MKN‑45细胞活性抑制剂中的应用

说明书

(一)技术领域

本发明涉及一种岩藻多糖在抗肿瘤中的应用，特别涉及一种岩藻多糖在制备PC-12细胞或MKN-45细胞活性抑制剂中的应用。

(二)背景技术

海洋藻类作为一种新的生物活性物质的来源正在迅速被研究，我国藻类资源十分丰富，特别是褐藻(Phaeophyta)资源，是海藻生产和消费大国。褐藻(Phaeophyta)是海洋藻类中的第二大种群，分为25个属，大约有1500种，是生长在海洋中的低等植物，在很多国家，褐藻(Phaeophyta)如墨角藻(Fucus)，海带(Laminaria japonica)，羊栖菜(Hizikiafusifarme)等作为食品来食用。褐藻中含有的多糖成分，如褐藻胶，岩藻多糖，褐藻淀粉等，均已在医药原料中广泛的应用。

岩藻多糖(Fucoidan)是Kylin在1913年首次从掌状海带中提取的，它是褐藻中所固有的细胞间多糖，存在于细胞壁基质中。研究表明岩藻多糖具有广泛的生物活性如抗氧化，抗肿瘤，抗凝血，抗病毒等。岩藻多糖不仅能够增强人体免疫力，还可以诱导肿瘤细胞凋亡，被认为是重要的自由基清除剂和抗氧化剂，岩藻多糖在功能性食品和药品行业具有很大的发展潜力。

岩藻多糖是以L-岩藻糖和硫酸基为主要特征的一类水溶性多糖，并伴有其他单糖(如半乳糖、甘露糖、木糖、葡萄糖醛酸、阿拉伯糖、鼠李糖)的杂多糖。岩藻多糖结构十分复杂，一方面不同褐藻的岩藻多糖，化学组成不尽相同，除了主要成分岩藻糖、硫酸基、其他单糖(甘露糖、半乳糖、葡萄糖等)以及糖醛酸外，有些还具有乙酰基和蛋白质；另一方面不同种褐藻中的岩藻多糖的结构也不相同，并且由不同提取方法得到的岩藻多糖分子量和结构也会不同。褐藻中的岩藻多糖，单糖组成以L-岩藻糖为主，L-岩藻糖通过α-(1→2)，α-(1→3)或α-(1→4)连接构成主链，主链除了由岩藻糖构成还含有其他单糖，并且有较多的分支。硫酸基主要结合在C-2或C-4位上，平均每两个岩藻糖基含有一个硫酸基。

(三)发明内容

本发明目的是提供一种岩藻多糖在制备PC-12细胞或MKN-45细胞活性抑制剂中的应用，本发明从海带中获得纯度高达71％-92％岩藻多糖的方法，提供测定岩藻多糖抗氧化及抗肿瘤活性的方法。

本发明采用的技术方案是：

本发明提供一种岩藻多糖在制备PC-12细胞或MKN-45细胞活性抑制剂中的应用。

进一步，所述岩藻多糖按如下方法制备：将干海带粉与溶剂混合，在60-100℃浸提1-5h，将提取液5000-10000r/min离心，取上清液50℃-70℃减压浓缩至1/2-1/15体积(优选浓缩至1/10)，然后加1M CaCl₂水溶液至无沉淀产生，搅拌4h，离心，取上清液，加入无水乙醇至乙醇体积浓度为60-90％(优选75％)，搅拌，在4℃下静置过夜，离心，沉淀冻干，得粗岩藻多糖；将粗岩藻多糖用纯水制成质量浓度为2％(m/m)的溶液，上样DEAE-52纤维素阴离子交换柱(3.2cm×22cm)，分别用纯水，1.0M NaCl水溶液，2.0M NaCl水溶液进行洗脱，分别收集三种洗脱馏分的流出液，经透析(14KDa)，冻干(6-10小时)，获得岩藻多糖；所述溶剂为体积浓度95％乙醇水溶液或纯水；所述溶剂体积用量以干海带粉质量计为25-50ml/g。

进一步，优选所述溶剂为纯水。

进一步，优选所述溶剂体积用量以干海带粉质量计为40ml/g；所述浸提条件为90℃浸提3h。

本发明取岩藻多糖的原料可以是人工养殖的海带，也可以是野生褐藻马尾藻(Scagassum)。

本发明所述纯水是指去离子水。

与现有技术相比，本发明有益效果主要体现在：

1)采用本发明的制备方法制取岩藻多糖作为抗肿瘤(PC-12，MKN-45)及抗氧化剂，具备纯度高(71％-92％)，操作简单，反应条件易于控制、工艺成本低等特点。

2)本发明的制备方法制取分离得到的岩藻多糖(FCSP，FCSP-1，FCSP-2，FCSP-3)，其抗肿瘤(PC-12，MKN-45)抑制率要高于市售岩藻多糖(纯度80％，来自于陕西天然原料汇)对PC-12，MKN-45的抑制率。

3)采用本发明制备的岩藻多糖作为抗肿瘤(PC-12，MKN-45)及抗氧化剂，也可以用于食品添加剂产品可制成粉剂、水剂、针剂等剂型。

(四)附图说明