[发明专利]MMHRL1转基因小鼠肝肿瘤细胞系的建立及应用

说明书

本发明提供了H‑ras12V转基因雄性小鼠肝肿瘤细胞系MMHRL1的建立和应用。具体地，本发明提供的所述H‑ras12V转基因雄性小鼠肝肿瘤细胞系MMHRL1的性状稳定，可稳定多次传代，并适用于建立肝肿瘤动物模型，是肝癌的基础和临床前期应用研究的理想细胞系。另外，该H‑ras12V转基因雄性小鼠肝肿瘤细胞系MMHRL1表达H‑ras突变癌基因及具有高激活的Ras/MAPK和PI3K/AKT/mTOR信号通路。本发明还提供了该细胞系在建立模型动物、筛选药物等方面的应用。

技术领域

本发明涉及生物学和肿瘤学领域，更具体地涉及新型H-ras12V转基因雄性小鼠肝肿瘤细胞系MMHRL1、及建立方法和应用。

背景技术

人类疾病的发生和发展是一个非常复杂的过程。深入研究各类疾病的发病机制及临床药物治疗效果，以达到预防和治愈各种疾病的目的，是人类坚持不懈的奋斗目标。但基于人道主义，不能采用直接对患者进行实验的方法。而遵循动物保护法，可以通过动物实验对各类疾病发生发展的规律和生命现象进行深入研究，以便达到控制人类疾病的发生发展进程，缓解患者的病痛，直至治愈疾病的目的。

在人类长期的摸索实践中发现，临床疾病研究将健康人体和患病人体作为研究对象难以推动医学的快速和深入发展，而且存在人文、伦理、道德等诸多问题。另外，临床疾病研究还存在大量样本积累和长时间观察等局限性。

人类疾病动物模型(Animal modle of human diseases)是指生物医学研究中建立的具有人类疾病表现的实验动物和材料。通过人类疾病动物模型研究人类疾病的发生和发展规律以及治疗措施是现代生物医学研究中至关重要的实验方法和手段。其中，细胞培养已有百余年的历史，是进行体外基础医学研究的重要方法。

随着人们生活方式的改变、社会工业化进程和寿命的延长，肿瘤发病率也随之升高，已成为威胁人类生命健康的主因之一。肝癌号称“癌中之王”，是我国重点的防治病患，但其病因繁多、过程复杂、治愈率差，机制尚不清楚，仍有待于深入阐明。

目前，建立的人类肝癌细胞系已有数十种之多，但由于各个肝癌细胞系的来源背景复杂，分子机制各异，不利于对病因进行精准分析。另外，这些细胞系还存在成瘤能力有限、传代不稳定等不足，也不利于肝肿瘤的基础研究。小鼠是典型的人类疾病动物模型，可以通过建立单一病因诱发的原发性肝肿瘤动物模型对肝癌的病因学进行深入剖析。但由于小鼠的体内实验费用高、耗时耗力，并且影响因素复杂，急需建立相应的小鼠肝肿瘤细胞系。但相比之下，小鼠肝肿瘤细胞系的建立较为困难。因此，目前可应用的小鼠肝肿瘤细胞系屈指可数。

所以，本研究领域迫切需要研发病因明确、传代稳定、高成瘤性、适用于建立多种动物模型的小鼠肝肿瘤细胞系。

发明内容

本发明目的在于为肝肿瘤基础研究和临床治疗提供一种肝肿瘤细胞系，该细胞系具有传代稳定、成瘤性好、适用于建立多种肝肿瘤动物模型。

本发明的另一个目的在于提供所述的H-ras12V转基因雄性小鼠肝肿瘤细胞系的制备方法以及用途。

在本项发明的第一方面，提供了一种H-ras12V转基因雄性小鼠肝肿瘤细胞，所述肝肿瘤细胞是H-ras12V转基因雄性小鼠肝肿瘤细胞MMHRL1，它保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO:C2016103。

在本发明的第二方面，提供了本发明第一方面中所描述的H-ras12V转基因雄性小鼠肝肿瘤细胞的子代细胞，所描述子代细胞能够导致裸鼠形成肝肿瘤。

在另一优选例中，所描述的子代细胞基本保留或完全保留亲代H-ras12V转基因雄性小鼠肝肿瘤细胞MMHRL1的特性。