[发明专利]一种检测喹诺酮类药物沙拉沙星的酶联免疫试剂盒

说明书

一种检测沙拉沙星的酶联免疫试剂盒及检测方法，所述的试剂盒由带有微孔的包被板，沙拉沙星标准品，抗沙拉沙星的包被抗体，沙拉沙星酶标抗原，浓缩洗涤液，显色液 A，显色液 B 和终止液组成；取包被抗沙拉沙星抗原的微孔包被板，加入沙拉沙星标准品或处理好的样品到各自的微孔中，同时加入沙拉沙星抗体工作液，再加入沙拉沙星酶，震荡反应，洗涤液洗涤，经底物显色，样本吸光值与其含有的沙拉沙星量成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中沙拉沙星的含量。

技术领域

一种快速高效检测食品中抗生素沙拉沙星的酶联免疫试剂盒及其检测方法，属于酶联免疫分析 (ELISA) 技术领域，主要用于食品中沙拉沙星残留的检测。

背景技术

沙拉沙星是氟喹诺酮类抗生素，具有下列特性：由于独特的化学结构，使其成为兽医临床药物中十分重要的抗生素。沙拉沙星对革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌和支原体类病原菌均具有广谱抗菌活性，在一定的浓度下对细菌支原体也具有杀菌作用，还能杀死对抗生素具有抗药力的细菌，例如抗p一乳酸菌素、氨基糖昔等。沙拉沙星因其具有独特的作用，自80年代开始就被广泛的应用于动物和鱼虾类的疾病的预防和治疗。但最近的研究发现，凡使用过沙拉沙星的动物，在一定时期内其产品都有残留，因其具有神经毒性和肾脏毒性，所以在动物食品中残留会对人类健康造成威胁和影响，欧美国家及我国均要求对其限量使用。2002年12月我国农业部公告第235号文规定在所有食品动物的肌肉、脂肪中最高残留限量为100 μg /kg，在所有食品动物的肝、肾中最高残留限量为200 μg/kg。因此，沙拉沙星己经列为兽药残留监控的重点。检测沙拉沙星残留量的化学方法主要有薄层色谱法(TLC)、气相色谱法(GC)、高效液相色谱法(HPLC)、气一质联机(GC/MS)、液一质联机(HPLC/MS)、毛细管电泳(CE)等，由于复杂的仪器设各和繁琐的过程，不适合现场监控和大量样本筛查。

免疫分析技术以其抗原抗体反应的高度专一性，以及测定方法简单、快速、灵敏度高、费用低和适于现场大批量样品筛选等优点，在农兽药残留分析中展示了广泛的应用前景。随着农药残留免疫学检测技术不断被完善和商品化，免疫学检测技术会成为食品农兽药残留和食品安全质量控制的有效快速检测手段。基于目前兽药残留诊断试剂的研究现状，及时开发出优于目前的、快速灵敏的检测试剂可谓是当务之急。虽然农兽药残留分析的方法虽然有很多，但是利用免疫学技术进行分析是特异性最好、检测时间最短的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高效快速检测沙拉沙星的酶联免疫试剂盒及检测方法，主要用于食品检测行业中沙拉沙星含量的检测。

本发明的技术方案是：该检测沙拉沙星的试剂盒是由 96 微孔的包被板，沙拉沙星标准品，抗沙拉沙星的包被抗体，酶标记的沙拉沙星抗原，浓缩洗涤液，显色液 A，显色液B 和终止液组成；所述的包被板配置有采用 1％明胶作为封闭液，抗体的稀释液选用0.15mol/L 的磷酸盐缓冲溶液，所述的浓缩洗涤液为含有 0.07％～ 0.1％吐温的 Tris-HCL缓冲溶液，显色液 A 为柠檬酸和柠檬酸钠缓冲溶液，显色液 B 为四甲基联苯胺和二甲基亚砜、含甘油的溶液，所述的终止液为 2mol/L 的硫酸溶液。

所述沙拉沙星半抗原是将沙拉沙星和8-氨基辛酸通过酞化方一法得到的。

所述酶标记物的标记酶为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酷酶，其中优选碱性磷酸酷酶；碱性磷酸酷酶标记的沙拉沙星半抗原可将碱性磷酸酷酶与沙拉沙星半抗原通过戊二醛法或过碘酸钠法将酶交联在沙拉沙星半抗原上。

单克隆抗体的制备

动物免疫：