[发明专利]检测硫氰酸钠的时间分辨荧光免疫试剂盒

说明书

本发明公开了一种检测硫氰酸钠的时间荧光分辨荧光免疫分析试剂盒。所述检测硫氰酸钠的时间分辨荧光免疫分析检测试剂盒是由多孔包被板、缓冲液、硫氰酸钠标准品、硫氰酸钠的抗体冻干品、铕标记的羊抗鼠抗体、洗涤液和增强液所组成。所述检测硫氰酸钠的时间荧光免疫分析试剂盒的检测方法包括下列步骤：(1)免疫原的制备；(2)包被原的制备；(3)单克隆抗体的制备；(4)样品的前处理及检测。本发明检测时间短、平均回收率高、样品前处理简单、能现场操作检测，应用广泛，检测成本低，同时具有检测特异性强，批内和批间差异小、灵敏度高和操作简单快速，且特别适合于大批量样品的检测等优点。

技术领域

本发明属于生物检测领域，具体的说，涉及一种检测硫氰酸钠的时间分辨荧光免疫分析试剂盒。

背景技术

硫氰酸钠（NaSCN）是生乳中天然存在的一种活性抗菌体系，其乳过氧化

物酶体系（LPS)可以抑菌保鲜。1991年，WHO和FAO的食品法典委员会公布的CAC/GL 13-1991《乳过氧化物酶体系用于原料乳的保鲜指南》中，硫氰酸钠作为LPS的活化剂被允许添加到牛奶中；我国也于随后颁布标准，允许将其添加到无冷链运输体系中用于原料乳保鲜，添加量为15mg/L。

但硫氰酸钠属有毒有害物质，其主要毒性作用为以抑制细胞色素氧化酶活性为主的急性毒性与以抑制碘转运及甲状腺素合成的慢性毒性，尤其对胎儿和婴儿的脑部与神经系统发育存在较大的危害。随着社会对食品安全重视度提高及原奶冷链运输的完善，国家废除了之前的标准并于2008年12月公布《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂品种名单（第一批）》，规定乳及乳制品中硫氰酸钠属违法添加物质。目前，我国尚未制定检测牛奶中硫氰酸钠的标准及限值。Ft%HWGE

而时间分辨荧光免疫分析法（TR-FIA）由于其特异性强、灵敏度高、操作简单、廉价，且特别适于大批量样品的检测等优点而越来越被人们所重视和采用。目前还没有针对硫氰酸钠检测的时间荧光免疫分析法的专利和文献报道。

发明内容

为解决以上技术问题，本发明的目的在于提供一种蔬菜水果中硫氰酸钠残留的检测时间分辨荧光免疫分析试剂盒。

本发明的目的之二在于提供一种快速简便地检测蔬菜水果中硫氰酸钠的时间分辨荧光免疫分析试剂盒的检测方法，用于定量或定性地检测乳制品中硫氰酸钠残留量。

本发明目的之一是这样实现的：检测硫氰酸钠的时间分辨荧光免疫分析试剂盒，其关键在于由多孔包被板、缓冲液、硫氰酸钠标准品溶液、抗硫氰酸钠的抗体冻干品、铕标记的兔抗鼠抗体、洗涤液和增强液体所组成。

本发明目的之二是这样实现的：检测硫氰酸钠的时间分辨荧光免疫分析试剂盒的检测方法，包括免疫原、包被原和单克隆抗体的制备以及样品前处理及检测，其关键在于：

(1) 免疫原的制备：将半抗原硫氰酸钠与牛血清白蛋白（BSA）偶联，得到免疫原（硫氰酸钠-BSA）；

(2) 包被原的制备：将半抗原硫氰酸钠与卵血清白蛋白（OVA）偶联，得到包被原（硫氰酸钠-OVA）；

(3) 单克隆抗体的制备：

a. 用步骤(1)的免疫原（硫氰酸钠-BSA）免疫小鼠，通过杂交瘤技术，得到分泌抗硫氰酸钠的单克隆抗体的杂交瘤细胞株；

b. 以体内诱生腹水法大量制备抗体，使用Protein G柱进行纯化，获得抗硫氰酸钠的单克隆抗体IgG；

c. 用步骤(2)的包被原包被96孔包被板；

(4) 样品的前处理及检测：