[发明专利]一种尿酸氧化酶的毛细管等电聚焦检测方法

权利要求书

1.一种尿酸氧化酶的毛细管等电聚焦检测方法，所述方法包括如下的步骤：

(1)将两性载体、毛细管等电聚焦凝胶、尿素、亚氨基二乙酸溶液、左旋精氨酸溶液、等电点标记物和待分析的尿酸氧化酶样品进行混合，形成混合液，尿素在混合液中的终浓度为1.92mol/L-2.23mol/L或3.83mol/L-4.46mol/L、亚氨基二乙酸溶液在混合液中的终浓度为2.97mmol/L-5.11mmol/L、左旋精氨酸溶液在混合液中的终浓度为74.35mmol/L-127.80mmol/L，

(2)将步骤(1)中的混合液上样于涂层毛细管，在合适温度、电压和聚焦时间下，通过毛细管电泳仪检测，得到等电聚焦谱图，

(3)根据步骤(2)的等电聚焦图谱中等电点标记物的迁移时间和pI值得到标准曲线，确定尿酸氧化酶样品各组分的pI值，

(4)根据步骤(2)的等电聚焦图谱信息，确定待分析的蛋白样品各组分的含量。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)的两性载体的范围为3-10，两性载体在混合液中的体积范围为1％-5％，两性载体选自Pharmalyte3-10、Pharmalyte5-8、Pharmalyte6.7-7.7、Servalyt4-9、Servalyt5-7、Servalyt6-9、Servalyt3-10中的一种或多种。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)的等电点标记物范围为pI4.1、pI5.5、pI9.5、pI10.0中的一种或多种。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)的尿酸氧化酶样品在混合液中的终浓度范围为0.1mg/mL-1mg/mL。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)的毛细管柱温为10-30℃，所使用的毛细管电压为15-40kv，聚焦时间为10-30分钟。

6.一种尿酸氧化酶的毛细管等电聚焦检测方法，所述方法包括如下的步骤：

(1)将两性电解质载体，尿素-cIEF凝胶溶液，左旋精氨酸阴极稳定溶液，亚氨基二乙酸阳极稳定溶液，pI 4.1、pI 5.5和pI 10.0蛋白标记，尿酸氧化酶样品混合，形成混合液，尿素-cIEF凝胶溶液在混合液中的终浓度为4.12mol/L，左旋精氨酸阴极稳定溶液在混合液中的终浓度为103.09mmol/L，亚氨基二乙酸阳极稳定溶液在混合液中的终浓度为4.12mmol/L，尿酸氧化酶样品在混合液中的终浓度为0.34mg/mL，

(2)将步骤(1)中的混合液上样于涂层毛细管，设置柱温为30℃，15kV聚焦15分钟，20kV分析30分钟，在280nm下进行检测，得到等电聚焦谱图，

(3)根据步骤(2)的等电聚焦图谱中等电点标记物的迁移时间和pI值得到标准曲线，确定尿酸氧化酶样品各组分的pI值，

(4)根据步骤(2)的等电聚焦图谱信息，确定待分析的蛋白样品各组分的含量。