[发明专利]一种金线莲组培苗快速繁殖方法

说明书

技术领域：

本发明属于植物繁殖领域，具体涉及一种金线莲组培苗快速繁殖方法。

背景技术：

金线莲别名金线兰、金丝草，是兰科(Orchidaceae)开唇植物花叶兰属(Anoectochilus Bl.)多年生珍稀草本植物，我国有23种左右，其中部分种全草民间作药用,为传统珍稀名贵中药材，它在民间使用范围较广，多用于治疗糖尿病、高血脂、乙型肝炎等疾病，素有“药王”、“金草”、“神药”、“乌人参”等美称，被称为“药中之王”。多年来，由于其市场需求大而导致人工过度采挖，加上金线莲自然繁殖率低、生长缓慢，野生的金线莲资源已非常稀少，濒临灭绝，早在1987年国务院就将金线莲列为重点保护的中药材之一，为国家二级保护植物。而由于人工种植金线莲又有较大的难度，目前人工种植的数量还非常有限。由于原材料量的限制，近年来金线莲产业有所萎缩。因此大力发展人工种植已显得非常必要和迫切。因为金线莲在临床中广泛应用,而且疗效极好,具有极高的经济效益和社会效益，因此市场需求越来越大，而人工种植的金线莲还远不能满足市场的需求，目前市场价格昂贵，由金线莲制成的干品目前售价每公斤达到1万元，市场金线莲鲜品价格亦高达800-1000元/公斤，若每亩能产出300公斤以上鲜品，则亩产值可达24万元以上。是目前农业种植业中效益最高的产业之一。大力发展金线莲的人工种植，不但可以满足人们对金线莲的需求，而且还可以因减少对野生资源的依赖而起到保护野生资源的目的，因此人工种植金线莲不但有很好的市场前景，而且对野生资源的保护也有重要的意义。

发明内容：

本发明的目的是提供一种污染率极低，从而有效的降低成本的金线莲组培苗快速繁殖方法。

本发明的金线莲组培苗快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：

A、选取天湖金线莲的健康株系，去掉根、叶片和叶鞘，取其茎条，洗净后切成带节茎段，消毒后接种到不定芽诱导培养基J1上，培养温度为23±2℃，光照强度500～1000lx，光照12h/d，获得不定芽，所述的不定芽诱导培养基J1每升含花宝1号1～2g，蛋白胨0.5～2g，肌醇80～120mg，甘氨酸1.5～2.5mg，盐酸硫胺素0.05～0.2mg，盐酸吡哆醇0.4～0.8mg，烟酸0.4～0.8mg，6-苄基腺嘌呤2.0～5.0mg，萘乙酸0.2～0.5mg，蔗糖15～20g，琼脂6～7g，pH 5.4-5.6；

B、分切不定芽，将高小于3厘米的丛生芽插植于玻璃培养瓶中的增殖培养基J2上，把高大于3厘米的不定芽单株插植于生根培养基JR上，用瓶塞塞住玻璃培养瓶的瓶口，将含有不定芽的增殖培养基J2和生根培养基JR的玻璃培养瓶横放于全自然光培养室中的培养架上，瓶口统一朝一方向，散射光能直接照射不定芽上，培养温度23-25℃，光照强度1000-3000lx，光照时间10-16h/d下培养，当增殖培养基J2在培养下收获增殖材料不定芽，增殖材料不定芽继续接种至新的玻璃培养瓶中的增殖培养基J2上，用瓶塞塞住玻璃培养瓶的瓶口，将含有不定芽的增殖培养基J2的玻璃培养瓶横放于全自然光培养室中的培养架上，瓶口统一朝一方向，散射光能直接照射不定芽上，培养条件为培养温度23-25℃，光照强度1000-3000lx，光照时间10-16h/d下培养，当增殖材料不定芽培养一个继代周期后进行接种转移，高小于3厘米的丛生芽插植于增殖培养基J2中，高大于3厘米的不定芽单株插植于生根培养基JR，如此循环，生根培养基JR上的不定芽长根后成为完整植株进行出瓶移栽；

所述的增殖培养基J2每升含花宝1号2～3g，蛋白胨0.5～2g，肌醇80～120mg，甘氨酸1.5～2.5mg，盐酸硫胺素0.05～0.2mg，盐酸吡哆醇0.4～0.8mg，烟酸0.4～0.8mg，6-苄基腺嘌呤2.0～3.0mg，萘乙酸0.2～0.5mg，蔗糖20～30g，琼脂6～7g，pH 5.4-5.6；

所述的生根培养基JR每升含花宝1号2～3g，蛋白胨0.5～2g，肌醇80～120mg，甘氨酸1.5～2.5mg，盐酸硫胺素0.05～0.2mg，盐酸吡哆醇0.4～0.8mg，烟酸0.4～0.8mg，6-苄基腺嘌呤0.2～0.5mg，萘乙酸2～5mg，活性碳500～1000mg，蔗糖20～30g，琼脂6～7g，pH 5.4-5.6。

优选，将步骤A的不定芽转接到不定芽诱导培养基J1上进行继代培养，培养温度为23±2℃，光照度500～1000lx，光照12h/d，继代周期为35-40天，继代培养4-5次后可获得大量的不定芽作为无性繁殖材料。