[发明专利]一种测定奥贝胆酸原料药有关物质的方法

说明书

本发明建立了一种能够控制奥贝胆酸有关物质的检测方法，具体地，选择适当的溶剂，通过HPLC‑ELSD对样品进行检测，已知杂质采用外标法，未知杂质及总杂采用1％的主成分对照品对产品的有关物质进行控制。

技术领域

本发明涉及原料药有关物质的测定，具体的，本发明涉及奥贝胆酸原料药有关物质的测定。

背景技术

奥贝胆酸(OBDS)是鹅去氧胆酸的结构修饰物6-乙基鹅去氧胆酸,它是Intercept制药公司开发的一种法尼酯X受体激动剂，可通过活化法尼醇X受体，间接抑制胆酸生物合成的限速酶细胞色素7A1(CYP7A1)的基因表达，进而抑制胆酸合成，可用于治疗原发性胆汁性肝硬化和非酒精性脂肪性肝病。

非酒精性脂肪肝炎是一种脂肪肝疾病，据Intercept称，非酒精性脂肪肝炎到2020年有望成为肝脏移植的主要因素。这种疾病目前尚无获得批准的治疗药物，这就催生了一个潜在重磅级的市场，促使生物制药公司在这一领域投入巨资进行药物研发。

奥贝胆酸具有较好的临床价值和应用前景，国内外的研究所和药企均十分重视对该药的研发和生产。目前，由于该原料药为三萜类化合物，没有共轭体系，紫外吸收很弱，原料有关物质的控制是难点，检索国内外相关文献及专利，均未见相关检测方法的报道。

发明内容

本发明的目的在于建立一种能够控制奥贝胆酸有关物质的检测方法，具体地，选择适当的溶剂，通过HPLC-ELSD(蒸发光检测器)对样品进行检测，已知杂质采用外标法，未知杂质及总杂采用1％的主成分对照品对产品的有关物质进行控制；由于蒸发光检测器灵敏度较差，需要通过适当溶剂的选择，增大样品浓度及进样量，才可满足测定要求；但是，在样品浓度和进样量增大的情况下，主峰严重过载，如果采用面积归一化及主成分自身对照法，均存在较大偏差，若采用外标法，能准确的对杂质的含量进行测定，确保药品的质量，该方法具有以下优点：1、采用适当的溶剂溶解OBDS，可使溶解度达到15-30mg/ml；2、能够将有关物质有效分离、并且能够量化控制；3、该方法具有普遍适用性，适用于向生产公司转移；4、该方法具有足够的灵敏度，可以对杂质进行有效控制。

本发明提供一种能够控制奥贝胆酸有关物质的检测方法，步骤为：1)使用乙腈和水混合溶剂溶解奥贝胆酸原料药：2)通过HPLC-ELSD对样品进行检测，色谱条件为：使用C18耐酸色谱柱，流动相为乙腈和0.1％甲酸；3)已知杂质采用外标法，未知杂质及总杂采用1％的主成分对照品对产品的有关物质进行控制。

在本发明的一个具体实施方案中，所述混合溶剂乙腈和水体积比为75：25-85:15，优选地，其体积比为80:20。

在本发明的一个具体实施方案中，所述样品的浓度为15-30mg/ml，优选地，所述样品浓度为20mg/ml。

在本发明的一个具体实施方案中，所述ELSD的漂移管温度为35-40度。

在本发明的一个具体实施方案中，色谱柱为C18酸性色谱柱，优选地，色谱柱为ZORBAX SB-C18色谱柱，其参数为4.6*250mm,5um

在本发明的一个具体实施方案中，流动相为乙腈和0.1％甲酸，其体积比为50:50-60:40，优选地，其体积比为55:45。

在本发明的一个具体实施方案中，流动相的流速为0.2-1.2ml/min，优选地，流动相的流速为1.0ml/min。

附图说明

图1：在稀释剂为乙腈：水(80:20，v/v)条件下，主峰平头，对称性良好。

图2：稀释剂为乙腈：水(90:10，v/v)条件下，主峰峰形前沿。