[发明专利]一种人HNRPA0多肽及其抗体制备方法

说明书

本发明公开了一种序列中部特异的人HNRPA0多肽以及抗体的制备方法，属于以抗体为特征的体外实验用的生物制品。N端特异的人HNRPA0多肽的氨基酸序列为：PKEDIYSGGGGGGS。抗人HNRPA0多肽抗体按以下方法制备：(1)人HNRPA0抗原表位分析；(2)人HNRPA0表位多肽合成；(3)合成多肽与载体蛋白交联；(4)制备兔抗人HNRPA0多肽抗体；(5)收集、分离得到含有抗体的血清，纯化抗体，即得到抗人HNRPA0多肽抗体。本发明制备的序列中部特异的抗人HNRPA0合成多肽抗体效价高、亲和力强、特异性好，可与天然人HNRPA0发生特异性结合反应；制备成本低；纯化后的抗体可以用于免疫印迹。该抗体为HNRPA0蛋白的基础研究，比如对HNRPA0的特性、功能、表达谱和含量的分析，及其相关疾病的研究提供了一个重要的工具。

1.技术领域

本发明涉及一种多肽及其抗体制备方法，这种抗体主要用于天然蛋白抗原的检测。

2.背景技术

1)HNRPA0功能：HNRPA0蛋白属于广泛表达的核不均一核糖核蛋白的A/B亚家族。核不均一核糖核蛋白是RNA结合蛋白，他们与核不均一核RNA形成复合物。在细胞核中，这些蛋白与mRNA前体密切相关，参与了mRNA前体的加工过程，以及mRNA代谢和转运等其他方面。虽然所有的核不均一核糖核蛋白都是细胞核中发现的，但是其中有些蛋白却可以同时分布在细胞核和细胞质中。核不均一核糖核蛋白家族蛋白成员具有不同的核酸结合特性。HNRPA0基因编码的蛋白有两个类似于RNA结合结构域RRM的重复序列，C末端富含甘氨酸。有研究发现，抑制SAPK2a/p38复合物可以阻断HNRPA0被MAPKAP-K2磷酸化以及细胞因子mRNA和HNRPA0的结合(EMBOJ.2002Dec 2；21(23)：6505-14)。

2)HNRPA0抗体产品信息：经检索，市场上有Anti-HNRPA0多克隆抗体产品，但是相关抗体产品所用抗原多肽序列与我公司所用抗原多肽序列不同。

3)HNRPA0抗体的应用：

利用一项蛋白质组学技术-鸟枪质谱法(shotgun mass spectrometry)分析发现，这个蛋白在精神分裂症患者的背外侧额前叶皮层中发生了差异性表达(Eur Arch Psychiatry Clin Neurosci.2009Apr；259(3)：151-63)。这项研究提示我们，HNRPA0作为一个重要的潜在标志物，对阐明精神分裂症这项复杂疾病的发病机制有重要意义。

3.发明内容

本发明提供了一种HNRPA0多肽，其序列为：PKEDIYSGGGGGGS。用此多肽制备的抗HNRPA0抗体可以在免疫印迹(Western blot)分析中特异识别组织或细胞中的天然HNRPA0蛋白。

抗HNRPA0抗体是通过以下步骤获得的：

步骤一：多肽序列的分析和设计：利用DNAstar软件对HNRPA0蛋白的氨基酸序列进行抗原表位分析，主要评估亲水性，抗原性，表面可能性，柔性区等指数，再结合过去制备抗体的实际经验，最终确定HNRPA0蛋白175-188位14个氨基酸作为合成多肽氨基酸序列，序列为PKEDIYSGGGGGGS。

步骤二：多肽合成和交联：采用ACT396全自动多通道多肽合成仪合成目的多肽，并采用质谱进行鉴定；为增强多肽的抗原性，将HNRPA0多肽与载体蛋白KLH采用Sulfo-SMCC交联法进行交联。

步骤三：多肽免疫和抗血清制备：将交联后的HNRPA0-KLH与弗氏佐剂混合乳化，在新西兰兔背部进行皮内注射免疫，并反复加强免疫，至取血检测抗体效价达到标准时停止免疫。