[发明专利]一种创制耐热芥蓝种质的方法

说明书

本发明涉及一种创制耐热芥蓝种质的方法，具体步骤如下：S1. 构建含有如SEQ ID NO:1所示MBF1c基因的重组超表达载体；S2. 将S1得到的重组超表达载体转化农杆菌，得到重组农杆菌；S3. 用重组农杆菌转染芥蓝外植体，经培养获得转化植株，筛选得到耐热芥蓝。本发明有益效果在于提供了一种创制耐热芥蓝种质的方法，该方法通过构建含有耐热相关转录辅激活因子MBF1c的重组载体，创制出耐热性增强的种质，对芥蓝新品种的选育有重要价值。

技术领域

本发明属于芥蓝育种技术领域，具体地，涉及一种创制耐热芥蓝种质的方法。

背景技术

芥蓝(Brassica oleracea var.alboglabra Bailey)为十字花科芸薹属蔬菜作物，起源于中国(瓦维洛夫,1935),原产中国南部(中国科学院华南植物研究所,1956)，最早对芥蓝进行分类研究的Bailey (1922)所用的研究材料就来自广州。芥蓝为华南地区的特产蔬菜之一，具有色泽翠绿、质地脆嫩和营养丰富的特征。近年来，已经被我国北方很多地区引种，并取得了成功，是中国优质创汇蔬菜之一。但芥蓝耐高温的能力比较差，一般都是在秋冬季栽培，早春可以栽培，初夏之际由于温度比较高，虽然在高温下也能生长，但产量低、品质变差。如果通过基因工程方法，创制耐热芥蓝种质，进而选育出耐高温的芥蓝新品种，则在高温条件下也能种植，可大大提高芥蓝栽培的经济效益。

高温胁迫是一种常见的非生物胁迫，植物在适应高温的过程中，进化出了一套严密的耐高温调控网络。多蛋白桥接因子1（Multi-protein Bridging Factor 1, MBF1）是一个高度保守的转录共激活子，该基因家族中的MBF1c是一个关键的耐热性调节因子，它在提高植物抗高温胁迫方面的能力尤为突出，在该基因的控制之下存在着一个紧密协调的热应激反应网络，包括海藻糖，水杨酸和乙烯信号转导途径，因此，可以通过超表达芥蓝BaMBF1c，创制耐热的芥蓝种质。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供了一种创制耐热芥蓝的方法，该方法通过构建含有BaMBF1c的重组载体，以及芥蓝的遗传转化，可以获得耐热性增强的芥蓝种质，对芥蓝新品种的选育有重要价值。

本发明的上述目的是通过以下技术方案予以实现的。

一种创制耐热芥蓝种质的方法，包括如下步骤：

S1. 构建含有如SEQ ID NO:1所示MBF1c基因的重组超表达载体；

S2. 将S1得到的重组超表达载体转化农杆菌，得到重组农杆菌；

S3. 用重组农杆菌转染芥蓝外植体，经培养获得转化植株，筛选得到耐热芥蓝。

S1所述MBF1c基因的DNA序列如SEQ ID NO:1所示，开放阅读框长(ORF)447bp。

进一步地，所述超表达载体的构建方法为：

S11. 利用超表达引物扩增得到MBF1c基因的ORF全长；

S12. 将S11克隆的片段连接到pBE-GFP载体，制得MBF1c基因的重组超表达载体。

进一步地，所述引物如SEQ ID NO:3~4所示，分别为：

MBF1-yxb –F: CGCGGGCCCGGGATCCATGCCGAGCAGAT；