[发明专利]一种猪支原体肺炎疫苗效力检验方法

说明书

技术领域

本发明属于兽用生物制品领域，具体涉及一种猪支原体肺炎疫苗效力检验方法。

背景技术

猪支原体肺炎(Mycoplasma pneumia of swine)是由猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneu-mae)引起的一种慢性呼吸道传染病，又称猪气喘病和猪地方流行性肺炎(Enzooticpneumia of pigs)，广泛流行于世界各养猪国家和地区，是一种顽固性慢性传染病，药物治疗效果不够理想，停药后容易复发，该病一旦在猪场流行,就很难根除。因此，预防、控制和净化猪气喘病须采取早期诊断、及时隔离、抗生素治疗或淘汰病猪、疫苗预防、全进全出、严格消毒等综合性措施，其中疫苗预防起着关键性作用。当前世界上研究应用的猪肺炎支原体疫苗以灭活苗为主，也有少数弱毒苗和基因工程苗。

目前用于猪支原体肺炎灭活疫苗的效力检验方法用猪进行免疫攻毒保护进行检验，部分灭活疫苗采用水佐剂，效力检验方法可采用测定相对抗原含量的方法替代用猪进行免疫攻毒保护，而对于油佐剂的灭活疫苗，该替代方法不适用。需要建立一种用于灭活疫苗的效力检验方法，从而缩短检测周期，节约检测成本，提高生物安全。

发明内容

本发明的目的是提供一种猪支原体肺炎疫苗效力检验方法，从而弥补现有猪支原体肺炎灭活疫苗效力检验的空白。

本发明的猪支原体肺炎灭活疫苗效力检验方法，包括以下步骤：

1)取体重200-350g的健康易感的豚鼠；

其中所述健康易感豚鼠为猪肺炎支原体ELISA抗体检测为阴性的豚鼠；

2)将健康易感的豚鼠随机分为免疫组和对照组；

3)其中免疫组的豚鼠注射要检测的猪支原体肺炎疫苗，而对照组的豚鼠不注射免疫

4)在免疫后14日，对实验组和对照组的豚鼠进行心脏采血，进行离心后，吸取上清检测猪肺炎支原体ELSIA抗体；判定待检测的猪支原体肺炎疫苗是否符合标准；

所述的离心条件，是7000r/min离心10分钟；

所述的判定标准，是对照组的豚鼠的ELISA抗体为阴性，免疫组的豚鼠的ELSIA抗体检测阳性率不低于80％。

所述的要检测的猪支原体肺炎疫苗包括猪支原体肺炎灭活疫苗或猪支原体基因工程亚单位疫苗。

本发明的猪支原体肺炎灭活疫苗效力检验方法可替代用猪进行免疫攻毒的效力检验，由于检验动物豚鼠易获得，易于饲养，占用场地小，大大地节约检验成本，检验周期短，不涉及用强毒攻击，生物安全性高。

具体实施方式

本发明采用健康易感豚鼠免疫猪支原体肺炎灭活疫苗，免后一定时间采血检测猪肺炎支原体ELISA抗体，通过抗体阴阳性判定疫苗的免疫效果。

下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。

一、猪支原体肺炎灭活疫苗对豚鼠最小免疫剂量试验

取体重200～350g健康易感(猪肺炎支原体ELISA抗体均为阴性)豚鼠25只，随机分成5组，每组5只，1～4组各腿部肌肉注射0.05ml、0.1ml、0.2ml、0.5ml猪支原体肺炎疫苗，第5组为对照组，免后14日，所有豚鼠心脏采血，7000r/min离心10分钟，吸取上清检测猪肺炎支原体ELSIA抗体。抗体检测结果表明对照组ELSIA抗体5/5阴性，0.05ml/只免疫组ELSIA抗体4/5阳性，0.1ml/只、0.2ml/只、0.5ml/只免疫组ELSIA抗体均5/5阳性综合以上的数据，确定猪支原体肺炎灭活疫苗对豚鼠的最小免疫剂量为0.05ml/只。考虑到实际应用时的检测效果，根据实验结果将猪支原体肺炎灭活疫苗用豚鼠检验的接种剂量定为0.1ml/只。

表1：抗体检测结果

注：S/N值≥1.8判为抗体阳性，S/N值＜1.8判为抗体阴性。

二、检验方法应用及与靶动物检验对比

取健康易感(猪肺炎支原体ELISA抗体均为阴性)豚鼠20只，随机分成4组，每组5只，1～3组各肌肉注射201501、201502、201503批猪支原体肺炎灭活疫苗0.1ml/只，第4组为对照组，免后14日，所有豚鼠心脏采血，7000r/min离心10分钟，吸取上清检测猪肺炎支原体ELSIA抗体，结果表明对照组ELSIA抗体5/5阴性，免疫组ELSIA抗体均5/5阳性。