[发明专利]一种猪瘟基因工程亚单位疫苗效力的抗体检验方法

说明书

本发明提供了一种猪瘟病毒基因工程亚单位疫苗、效力检验方法，取健康的易感家兔作为检验对象，分为对照组和免疫组；对免疫组家兔进行注射，注射猪瘟病毒基因工程亚单位疫苗，而对照组的家兔不注射任何物质；注射疫苗21日后，对免疫组和对照组的家兔均进行心脏采血，心脏血分别经过离心后取上清液，分别检测猪瘟ELSIA抗体，抗体至少4/5为阳性则证明猪瘟病毒基因工程亚单位疫苗效力检验合格。本发明的猪瘟病毒基因工程亚单位疫苗效力检验方法，可替代用猪进行免疫攻毒的效力检验，由于检验动物家兔易获得，节约检验成本，检验周期短，不涉及用猪瘟强毒攻击，生物安全性高。

技术领域

本发明涉及一种猪瘟基因工程亚单位疫苗(293T-E2)效力的抗体检验方法，属于兽用生物制品领域。

背景技术

猪瘟(slassical swine fever，CFS)以出血和发热为主要特征，呈急性或慢性经过，是一种对猪危害性极大的传染病，被国际兽疫局列为A类动物传染病。在世界许多国家和地区，传统疫苗接种是控制猪瘟的重要手段。目前使用的弱毒疫苗主要是中国猪瘟兔化弱毒疫苗、日本GPE疫苗和法国的Thireval疫苗。20世纪70年代后期，猪瘟的流行形式发生了很大变化。地区散发性流行及非典型猪瘟症状的发生，特别是近年来国内外应用单克隆抗体对C-株检测时发现有不同的反应模式，猪瘟免疫屡屡失败等，表明猪瘟病毒的抗原性可能存在着变异，从而使有人对传统弱毒疫苗提出了质疑。随着传代次数的增加和对不同细胞的适应性繁殖，疫苗毒株可能发生异质性或抗原漂移加之数十年来CSFV在大规模免疫接种压力下可能出现抗原变异。

这些情况都表明，现有的传统疫苗已不能适应新形势的需要，研究和开发新型猪瘟疫苗机是大势所趋。分子生物学技术的兴起和发展，为新型猪瘟疫苗的研究和开发奠定了基础。基因缺失弱毒疫苗、亚单位疫苗和活载体疫苗是目前研究的热点。

猪瘟病毒基因工程亚单位疫苗属于灭活疫苗，除采用靶动物(猪)进行免疫攻毒的效力检验方法外，目前还没有可用的替代方法，由于采用靶动物(猪)进行免疫攻毒的方法检测周期长(51日)，饲养和检验成本高，检验过程中涉及使用猪瘟强毒，为解决以上问题，急需建立可行的有效的实验动物效力检验方法用于灭活疫苗的效力检验，能够缩短检测周期，节约检测成本，提高生物安全。

发明内容

本发明的目的是提供一种猪瘟病毒基因工程亚单位疫苗效力检验方法，可替代常规的用猪进行免疫攻毒的效力检验，从而弥补现有亚单位疫苗效力检验的空白。

本发明检验方法，包括如下的步骤：

1)取健康的易感家兔作为检验对象，按照体重、性别随机分为对照组和免疫组，免疫组至少设有2个平行组；

所述的易感家兔，为猪瘟病毒ELISA抗体为阴性的家兔；

2)对免疫组家兔注射待检测的猪瘟病毒基因工程亚单位疫苗(293T-E2)，而对照组的家兔不注射；注射疫苗的家兔和对照组的家兔按照正常饲养方式饲养；

3)在步骤2)注射疫苗21日后，对免疫组和对照组的家兔均进行心脏采血，血液经过离心后取上清液，分别检测猪瘟ELSIA抗体，抗体为阳性则证明猪瘟基因工程亚单位疫苗达到保护作用。

优选的，步骤1)中，所述的对照组不设平行组；所述的免疫组设有平行组，每个平行组设立的家兔只数与对照组相同。

优选的，步骤2)中，所述的猪瘟病毒基因工程亚单位疫苗的注射方式为皮下静脉注射，注射部位为家兔的颈部。

优选的，步骤2)中，所述的猪瘟病毒基因工程亚单位疫苗的注射剂量为0.2ml/只。

优选的，步骤3)中，离心时的速度为7000r/min，离心时间为10分钟。