[发明专利]人尿液中儿茶酚胺类物质和其甲氧基代谢物含量的检测方法

说明书

本发明提供了一种人尿液中儿茶酚胺类物质和其甲氧基代谢物含量的检测方法，该方法是先将收集到尿液样品用盐酸溶液酸化至pH1.0左右，以防止尿液氧化变质，再将预处理好的尿液样品上样至固相微萃取柱，依次用水和氨化甲醇洗脱，收集的溶液氮气吹干后用流动相溶解，然后用尼龙NYLL滤头过滤，最后采用高效液相色谱电化学法检测，色谱柱为ACCHROM XCharge C18柱、流动相为0.2v/v%三氟乙酸水溶液、柱温为30℃、流速为1.0 mL/min、检测电压为+0.9V。该方法可以缩短色谱柱平衡时间，噪声小、基线较平稳、峰性较为尖锐，有效的延长色谱柱的使用寿命。

技术领域

本发明属于临床药物分析检测技术领域，具体是一种人尿液中儿茶酚胺类物质和其甲氧基代谢物含量的检测方法。

背景技术

嗜铬细胞瘤(Pheochromocytomas)是肾上腺髓质及肾上腺外副神经节系统产生儿茶酚胺的嗜铬细胞所发生的肿瘤。主要的临床症状表现为阵发性的高血压、头痛、心悸、焦虑、出汗和高血糖。儿茶酚胺类物质主要有去甲肾上腺素(Norepinephrine，NE)、肾上腺素(Epinephrine，E)和多巴胺(Catecholamine，CA)，嗜铬瘤细胞分泌大量的儿茶酚胺类物质使得交感神经功异常增强和持续，导致上述症状的发生。去甲苄肾上腺素(Normetanephrine，NMN)和间甲肾上腺素(Metanephrine，MN)是儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)的代谢产物。有报道称：甲氧基代谢产物(MNs)中的MN和NMN是比较好的诊断嗜铬细胞瘤的生物检测手段。与儿茶酚胺类物质相比，MNs具有更长的半衰期、更稳定的血药浓度和不容易受到食物和药物的影响。COMT广泛分布于肾上腺髓质和嗜铬细胞瘤细胞，MNs的浓度与肿瘤的体积密切相关。据文献报道，测定游离的甲氧基代谢产物更为普遍和适用。测定多巴胺类化合物(CAs)和MNs含量的方法主要有毛细管电泳法、LC-ECD、LC-MS等。目前，临床检测血液或尿样中儿茶酚胺类物质和其甲氧基代谢物采用的是离子对液相色谱-电化学检测方法，该方法在流动相的水相中加入了磺酸盐作为离子对，造成色谱柱平衡时间长、噪声较大基线不稳定、有时峰形拖尾较为严重。

本发明旨在通过改性的C18色谱柱，简化流动相组成，缩短平衡色谱柱时间，获得良好的色谱分离曲线，从而建立临床上尿液中儿茶酚胺类物质和其甲氧基代谢物含量的高效液相色谱电化学检测法。

发明内容

解决的技术问题：本发明的目的是解决现有尿样中儿茶酚胺类物质和其甲氧基代谢物的检测方法色谱柱平衡时间长、噪声较大基线不稳定、峰形拖尾较为严重的技术问题，提供一种固相萃取-高效液相色谱电化学检测法，该方法可以缩短色谱柱平衡时间，噪声小、基线较平稳、峰性较为尖锐，有效地延长色谱柱的使用寿命。

技术方案：人尿液中儿茶酚胺类物质和其甲氧基代谢物含量的检测方法，是将尿液样品经酸化预处理后进行固相萃取，然后采用高效液相色谱电化学法检测。

所述酸化预处理是指用10mol/L的盐酸溶液将尿液样品酸化至pH1.0。

所述固相萃取是指将预处理的尿液样品上样至萃取柱，用水淋洗后再用2％氨化甲醇洗脱。

所述高效液相色谱电化学法的色谱柱为ACCHROM XCharge C18柱、流动相为0.2v/v％三氟乙酸水溶液、柱温为30℃、流速为1.0mL/min、检测电压为+0.9V。

有益效果：固相萃取-高效液相色谱电化学检测法测定人尿液中儿茶酚胺类物质和其甲氧基代谢物的含量，主要通过选用改性的C18色谱柱，克服了传统的离子对高效液相色谱-电化学法对其检测的缺点，如流动相含有辛烷磺酸钠等易造成水相中产生气泡、色谱柱平衡时间长、噪声较大基线不稳定、有时峰形拖尾较为严重等，采用小分子挥发性三氟乙酸水溶液作为流动相，缩短色谱柱平衡时间、噪声小、基线较平稳、峰性较为尖锐，大大改善了色谱条件，获得良好的色谱分离曲线，可满足临床上尿液中儿茶酚胺类物质和其甲氧基代谢物的含量检测要求。