[发明专利]一株杂交瘤细胞株及其分泌的抗牛传染性鼻气管炎病毒单克隆抗体和应用

说明书

本发明属于细胞工程领域，特别是属于兽用生物制品领域，更为具体的说是涉及一株能稳定分泌抗牛传染性鼻气管炎病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用。该杂交瘤细胞株5F9，已于2016年8月31日在中国普通微生物菌种保藏管理中心保藏，其保藏编号是：CGMCC No.12700。本发明通过将这一杂交瘤细胞分泌的抗牛传染性鼻气管炎病毒单克隆抗体与异硫氰酸荧光素（FITC）结合，进而建立了快速、敏感的IBRV检测方法。对于我国进出口牛及其肉制品IBRV检测具有重要意义。

技术领域

本发明属于细胞工程领域，特别是属于兽用生物制品领域，更为具体的说是涉及一株杂交瘤细胞株及其分泌的抗牛传染性鼻气管炎病毒单克隆抗体和应用。

背景技术

牛传染性鼻气管炎( Infectious bovine rhinotracheitis, IBR) 是由牛传染性鼻气管炎病毒( Infectious bovine rhinotracheitis virus, IBRV) 引起的牛的一种急性、热性、接触性传染病。IBRV又称牛疱疹病毒1型、坏死性鼻炎病毒和传染性脓疱外阴-阴道炎病毒。该病以高热、呼吸困难、鼻炎、窦炎和上呼吸道炎症为特征，还可引起生殖系统损害, 出现流产和死胎以及发生肠炎和小牛脑炎等症状, 有时也发生眼结膜炎和角膜炎。继发性的细菌感染能导致更严重的呼吸道疾病。

我国规定, 进出口牛及其肉制品必须检测IBRV, 这使得该病的检测方法迅速发展起来。实践中对于该病的检测首先要结合流行病学和临床检查做出初步诊断, 然后再根据实验室方法做出确切的判断。

对于牛传染性鼻气管炎病毒的检测，传统方法多为血清学方法，如中和试验、间接血凝试验等。这些方法存在着不同程度的缺点，或灵敏度不高，或需要时间较长。PCR是目前检测牛传染性鼻气管炎病毒比较快速、灵敏、简单的方法之一，特别是对牛传染性鼻气管炎病毒潜伏感染的确诊，特异性强，还可做活体检查，但假阳性率较高。除了初步建立的PCR方法，目前国内尚未见有其他抗原诊断方法的报道，为此，开展牛传染性鼻气管炎病毒抗原诊断方法的研究，为我国牛传染性鼻气管炎病毒流行病学调查，提供一种良好的抗原检测手段，对今后疫病的防控和消灭都具有重大意义。

作为实验室诊断试剂，单克隆抗体以其特异性强、纯度高、均一性好等优点，广泛应用于酶联免疫吸附试验、放射免疫分析、免疫组化和流式细胞仪等技术。

目前国内外针对IBRV的单克隆抗体制备及利用相关单克隆抗体进行IBRV检测的方法研究还未见报道。因此制备得到能稳定分泌抗牛传染性鼻气管炎病毒的单克隆抗体杂交瘤细胞，对于商品化开发生产快速、敏感的IBRV检测方法具有重要意义，是快速、敏感IBRV检测方法研究的坚实基础。

发明内容

本发明的目的是提供一株能稳定分泌抗牛传染性鼻气管炎病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

本发明中能稳定分泌抗牛传染性鼻气管炎病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株为杂交瘤细胞株5F9，已于2016年8月31日在中国普通微生物菌种保藏管理中心保藏，其保藏编号是：CGMCC No.12700。

在本发明中所述的杂交瘤细胞株5F9的制备方法是：由纯化的牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)为抗原免疫BALB/c小鼠，细胞融合后，用间接IBRV-ELISA和细胞间接免疫荧光进行筛选获得能稳定分泌抗牛传染性鼻气管炎病毒单克隆抗体的细胞株。该细胞株体外传代培养稳定，培养上清ELISA效价为10000，染色体数目为99条。

并且，本发明保护由所述杂交瘤细胞株5F9产生的单克隆抗体。

进一步地，在本发明中保护由所述杂交瘤细胞株5F9产生的单克隆抗体制备得到的抗牛传染性鼻气管炎病毒单克隆荧光抗体。

这一荧光抗体的制备方法是将前述方法获得的抗牛传染性鼻气管炎病毒单克隆抗体与异硫氰酸荧光素（FITC）结合而成。