[发明专利]多价肺炎球菌多糖结合疫苗及其制备方法

说明书

多价肺炎球菌多糖结合疫苗及其制备方法。一种具有免疫原性的多糖‑蛋白质缀合物，由来自于肺炎链球菌的多糖与蛋白质组成缀合物，多糖属于血清型为1、2、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、16F、17F、18C、19A、19F、20、20F、23A、23F和33F的荚膜多糖。本发明提供的缀合物，血清覆盖率达90％以上，能对2月龄以上的人群产生保护效果。

技术领域

本发明涉及一种共价缀合物，尤其涉及一种多糖和蛋白质通过共价结合而得的缀合物，以及制取该种缀合物的方法，和在肺炎链球菌疫苗制取中的应用。

背景技术

肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)是链球菌属下的一种球状的革兰氏阳性菌，具有α溶血性。由肺炎链球菌引致的肺炎是在年幼或年长的人中最经常出现。肺炎链球菌也是一种普遍导致成人感染细菌性脑膜炎的病菌。此外，肺炎链球菌亦会导致不同种类的疾病，如：急性鼻窦炎、中耳炎、骨髓炎、脓毒性关节炎、心内膜炎、腹膜炎、心囊炎和蜂窝组织炎等。

治疗由肺炎链球菌疾病大多会使用β内酰胺类抗生素。早期，差不多所有肺炎链球菌的菌株都对青霉素敏感，随着抗生素使用率的提高，病菌对抗生素的抵抗亦发生上升的趋势。

自2000年起，一种七价的肺炎链球菌结合疫苗在美国被建议使用，主要适合2个月～23个月大的婴儿或2岁～5岁的孩童，可以保护孩童免受肺炎链球菌的深层感染，如：败血病及脑膜炎。

肺炎链球菌在人和动物体内可产生荚膜。根据荚膜内多糖抗原性的不同已将肺炎球菌分为91个血清型。

中国发明专利申请200680017776.8公开了一种多价肺炎球菌多糖-蛋白质缀合物组合物，其包含13种不同的多糖-蛋白质缀合物，以及生理学上可接受的载体，其中每种缀合物包含缀合到载体蛋白的来自不同血清型的肺炎链球菌的夹膜多糖，并且所述夹膜多糖从血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F和23F制备，其中所述载体蛋白是CRM197。

在现有上市产品中，已经出现了15价的疫苗，但此类疫苗所能实现的免疫覆盖率仍有待进一步提高。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种具有免疫原性的多糖-蛋白质缀合物，以利于制造多价肺炎球菌多糖结合疫苗。

本发明的另一个目的在于提供一种制取多价肺炎球菌多糖结合疫苗的方法，通过对优化荚膜多糖与载体蛋白的结合工艺，提高结合效率和缀合物收获率，提高缀合物 原液的稳定性和免疫原性，获得具有免疫原性的多糖-蛋白质缀合物，便于后续的纯化和应用。

本发明的再一个目的在于提供一种具有免疫原性的多糖-蛋白质缀合物在制备肺炎链球菌结合疫苗中的应用。

一种具有免疫原性的多糖-蛋白质缀合物，由来自于肺炎链球菌的多糖与蛋白质组成缀合物，荚膜多糖的血清型为1、2、3、4、5、6A、6B、7F、8、9N、9V、10A、11A、12F、14、15B、16F、17F、18C、19A、19F、20、20F、23A、23F和33F的荚膜多糖。

另一种具有免疫原性的多糖-蛋白质缀合物，将来自于肺炎链球菌的荚膜多糖降解为200,000Da～300,000Da的多糖，而与CRM197蛋白质组成缀合物。

本发明提供的肺炎链球菌荚膜多糖的制取方法如下：

将灭活的肺炎球菌离心，收集上清液，经超滤浓縮，加入十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)，离心收集上清液；经离心的上清液再经过三次乙醇沉淀，离心收集沉淀即为粗制多糖；