[发明专利]一种高效稳定的三七无性繁殖方法

说明书

技术领域

本发明属于植物栽培领域，具体涉及一种高效稳定的三七无性繁殖方法。

背景技术

三七[Panax notoginseng(Burk)F.H.Chen]又名田七，系五加科人参属植物，享有“金不换”、“南国神草”、“人参之王”等美誉，是我国传统名贵中药材。三七味甘、微苦、性温，具有防治癌症、抗衰老、抗疲劳、抗炎、降血压、降血脂等多方面的药理作用和保健功能，其主要药理活性成分是皂苷，目前尚不能人工合成。三七对生长条件要求苛刻，全世界仅云南省文山州以及广西部分地区适宜生长，加之生长周期长、病虫害严重、连作障碍、农药残留等问题，市场上三七资源供不应求。

各地看到市场对三七的巨大需求后都试图发展三七的栽培种植。但是，三七种苗的来源比较困难，只能依靠从广西、云南外购种苗，增加了三七栽培种植的成本，成本优势小。

无性繁殖是指不经生殖细胞结合的受精过程，由母体的一部分直接产生子代的繁殖方法。在林业上常用树木营养器官的一部分和花芽、花药、雌配子体等材料进行无性繁殖。花药、花芽、雌配子体常用组织培养法离体繁殖。生根后的植物与母株法的基因是完全相同的。用此法繁育的苗木称无性繁殖苗。

华南农业大学陈伟荣等(陈伟荣等，三七试管苗繁殖技术的研究，华南农业大学学报，1992，P69-75)以三七四种外植体为材料，研究愈伤组织的诱导、植株的分化、壮苗及生根的情况，探讨获得高分化率的试管苗再生途径。结果表明以MS为基本培养基，选用幼嫩花序为外植体，愈伤组织诱导率及试管苗分化率高，在加入2，4-D的诱导培养基暗条件下可直接诱导出胚状体。愈伤组织在光下分化培养也可发生不定芽。通过胚状体发生途径分化成苗率高。成苗过程中，GAs与MET分别起到促进胚状体成热与生根作用。1989年初首次获得试管苗，现共获得植株2214株，为建立三七试管苗工厂生产研究打下差础。

中国科学院昆明植物研究所郑光植等(郑光植等，三七愈伤组织的培养，云南植物研究，1989，P255-262)在MS培养基中加入不同浓度的KT和2,4-D，综合考虑三七愈伤组织生长缓慢兼顾皂苷含量，较合适的KT浓度为0.7ppm，较合适的2,4-D浓度在2-3ppm之间。在培养基中补充各种添加剂，结果以椰子乳和水解乳蛋白较好。综合生长和皂苷含量以20％的椰子乳和0.7％的水解乳蛋白较合适。从21个三七愈伤组织无性繁殖系中筛选出了5个较优的无性系，特别是其中4号无性系更优，无论生长速率还是总皂苷含量都更高。通过以上研究，使三七愈伤组织的生长速率达220毫克/升/天，是原初培养愈伤组织(54.0mg千重/升/天)的4倍。愈伤组织中总皂苷含量高达13％，是原初培养愈伤组织(5.37％)的2.4倍，为原植物的3倍。从而证明了三七培养组织次级代谢的全能性是可调节的，为三七细胞工程的工业生产应用打下了初步基础。

无性繁殖技术可快速繁殖三七种苗，是有效解决三七资源供不应求问题的途径之一。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高效稳定的三七无性繁殖方法，既保证成活率又保证种苗含有较高的基础总皂苷。

本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：

一种三七无性繁殖方法，包括外植体的选取、外植体的消毒、丛生芽的诱导、丛生芽的增殖、生根培养、炼苗移栽，其特征在于，移栽所用的生长基质由如下重量份的物质混合而成：园土，80-100份；膨润土，25-35份；高岭土，10-20份；黄沙，10-20份；糙米，3-7份；水溶性锌盐，0.8-1.2份；水溶性镁盐，0.8-1.2份；水溶性钾盐，0.6-0.8份；水溶性铵盐，0.6-1.0份；甘草提取物，4-8份。

优选地，甘草提取物的制备方法为：将甘草用体积百分含量为60-80％的乙醇热回流提取，提取液浓缩后冷冻干燥得冻干粉。

优选地，所述水溶性锌盐选用硫酸锌、硝酸锌中的一种或多种，所述水溶性镁盐选用硫酸镁、硝酸镁、氯化镁中的一种或多种。

优选地，所述水溶性钾盐选用硫酸钾、硝酸钾、氯化钾中的一种或多种，水溶性铵盐选用硫酸铵、硝酸铵、碳酸铵中的一种或多种。

优选地，外植体选取一年生的休眠芽，即地下根茎。

优选地，外植体的消毒方法为：先将外植体表面清洗干净，再用75％酒精消毒，最后用0.2％氯化汞消毒，吸干即可。