[发明专利]一种检测尿微量白蛋白斑点金渗滤试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及医学检验技术领域，尤其涉及一种检测尿微量白蛋白斑点金渗滤试剂盒及其应用。

背景技术

白蛋白是一种血液中的正常蛋白质，但在生理条件下尿液中仅出现极少量白蛋白。微量白蛋白尿反映肾脏异常蛋白质渗漏。人体代谢正常情况下，尿中的白蛋白极少，具体到每升尿白蛋白不超过20mg(<20mg/L)，所以叫微量白蛋白。如果在体检后发现尿中的微量白蛋白在20mg/L-200mg/L范围内，就属于微量白蛋白尿。临床中，通常应用尿微量蛋白指标来监测肾脏疾病的发生。

尿微量蛋白的检测是早期发现肾病最敏感、最可靠的诊断指标之一。通过尿微量白蛋白的数值，结合发病情况、症状以及病史陈述就可以较为准确的诊断病情和判断病程。通过规范治疗肾脏后，肾单位得以修复，尿液中白蛋白的量恢复正常水平，所以尿微量白蛋白可作为肾脏疾病预后的一个指标。

尿微量白蛋白检测技术主要有免疫比浊法、胶体金法、酶联免疫法等。免疫比浊法相对操作较为繁琐且在高浓度抗原存在的情况下易出现钩状效应，从而影响测量的结果；同时其不适宜小批量包装，限制了其在基层医院的推广。胶体金法测试时间较长，精密度较差，且容易受环境条件的影响。酶联免疫法则操作极为繁琐且对操作者要求较高，检测耗时久，限制了其在临床中的推广应用。

发明内容

本发明解决的技术问题在于提供一种检测尿微量白蛋白斑点金渗滤试剂盒及其应用，具有检测时间短、精密度好的特点。

有鉴于此，本发明提供了一种检测尿微量白蛋白的斑点金渗滤试剂盒，包括：pH值为6.5～6.7的样本稀释液、pH值为6.2～6.4的洗涤液、胶体金标记人血清白蛋白抗体、尿微量白蛋白层析器和定标卡，所述样本稀释液包括Triton-100、磷酸盐缓冲液溶液和Tris缓冲液溶液；所述洗涤液包括牛血清白蛋白、磷酸盐缓冲液溶液和Tris缓冲液溶液。

优选的，所述样本稀释液中Triton-100的浓度为0.1～10％，磷酸盐缓冲液溶液的浓度为0.005～1mol/L，Tris缓冲液溶液的浓度为0.01～1mol/L；所述洗涤液中牛血清白蛋白的浓度为0.1～10％，磷酸盐缓冲液溶液的浓度为0.01mol/L，Tris缓冲液溶液的浓度为0.01～1mol/L。

优选的，所述磷酸盐缓冲液溶液由以下原料配制：Na₂HPO₄ 0.263-0.376重量份、KH₂PO₄ 1.109-1.000重量份、NaCl 6重量份、KCl 0.2重量份、蒸馏水1000重量份、牛血清白蛋白7重量份；所述Tris缓冲液溶液由三羟甲基氨基甲烷4.6-5.5重量份、KH₂PO₄ 3.0-2.1重量份、NaCl 8重量份、KCl 0.3重量份、蒸馏水1200重量份、牛血清白蛋白9重量份配制而成。

优选的，所述胶体金标记人血清白蛋白抗体按照如下方法制备：将质量分数为1％的氯金酸与双蒸水按体积比1：79配成A液；将质量分数为1％的柠檬酸三钠、质量分数为1％的鞣酸、25mM K₂CO₃与双蒸水按体积比4：0.035～0.080：0.035～0.080：15.84～15.93配成B液；将所述A液和B液在水浴内同时加热至59～61℃，搅拌A液，快速加入B液中，继续搅拌1分钟，在10～13分钟内加热至沸腾，得到胶体金液；利用0.25M K₂CO₃调整所述胶体金液pH值为6.8～7.1；将人血清白蛋白抗体原液在4℃下以6000～13000r/min速度离心60分钟，吸取上清液；将所述上清液装入透析袋，用双蒸水透析去除盐分后，装瓶冷冻，得到人血清白蛋白抗体；将所述人血清白蛋白抗体缓慢加入所述胶体金液中进行标记，所述人血清白蛋白抗体与所述胶体金液的质量体积比为0.27～0.30mg：100ml，搅拌15分钟后，依次加入1～30％迭氮钠和0.1～10％牛血清白蛋白，所述迭氮钠、牛血清白蛋白与所述胶体金液的体积比为500μl：100μl：100ml，搅匀后在2.5～4.0℃，6000r/min条件下离心30分钟，去除上清液，沉淀物即胶体金标记人血清白蛋白抗体。

优选的，所述柠檬酸三钠、鞣酸、K₂CO₃与双蒸水的体积比为4：0.08：0.08：15.84，所述胶体金液中形成直径为10＜D＜11nm的胶体金颗粒。