[发明专利]一种检测尿微量白蛋白斑点金渗滤试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种检测尿微量白蛋白的斑点金渗滤试剂盒，其特征在于，包括：

pH值为6.5～6.7的样本稀释液、pH值为6.2～6.4的洗涤液、胶体金标记人血清白蛋白抗体、尿微量白蛋白层析器和定标卡，

所述样本稀释液包括Triton-100、磷酸盐缓冲液溶液和Tris缓冲液溶液；

所述洗涤液包括牛血清白蛋白、磷酸盐缓冲液溶液和Tris缓冲液溶液。

2.根据权利要求1所述的斑点金渗滤试剂盒，其特征在于，

所述样本稀释液中Triton-100的浓度为0.1～10％，磷酸盐缓冲液溶液的浓度为0.005～1mol/L，Tris缓冲液溶液的浓度为0.01～1mol/L；

所述洗涤液中牛血清白蛋白的浓度为0.1～10％，磷酸盐缓冲液溶液的浓度为0.005～1mol/L，Tris缓冲液溶液的浓度为0.01～1mol/L。

3.根据权利要求1所述的斑点金渗滤试剂盒，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液溶液由以下原料配制：Na₂HPO₄ 0.263-0.376重量份、KH₂PO₄ 1.109-1.000重量份、NaCl 6重量份、KCl0.2重量份、蒸馏水1000重量份、牛血清白蛋白7重量份；所述Tris缓冲液溶液由三羟甲基氨基甲烷4.6-5.5重量份、KH₂PO₄ 3.0-2.1重量份、NaCl 8重量份、KCl 0.3重量份、蒸馏水1200重量份、牛血清白蛋白9重量份配制而成。

4.根据权利要求1所述的斑点金渗滤试剂盒，其特征在于，所述胶体金标记人血清白蛋白抗体按照如下方法制备：

将质量份数为1％的氯金酸与双蒸水按体积比1：79配成A液；将质量份数为1％的柠檬酸三钠、质量份数为1％的鞣酸、25mM K₂CO₃与双蒸水按体积比4：0.035～0.080：0.035～0.080：15.84～15.93配成B液；将所述A液和B液在水浴内同时加热至59～61℃，搅拌A液，快速加入B液中，继续搅拌1分钟，在10～13分钟内加热至沸腾，得到胶体金液；

利用0.25M K₂CO₃调整所述胶体金液pH值为6.8～7.1；

将人血清白蛋白抗体原液在4℃下以6000～13000r/min速度离心60分钟，吸取上清液；将所述上清液装入透析袋，用双蒸水透析去除盐分后，装瓶冷冻，得到人血清白蛋白抗体；

将所述人血清白蛋白抗体缓慢加入所述胶体金液中进行标记，所述人血清白蛋白抗体与所述胶体金液的质量体积比为0.27～0.30mg：100ml，搅拌15分钟后，依次加入1～30％迭氮钠和0.1～10％牛血清白蛋白，所述迭氮钠、牛血清白蛋白与所述胶体金液的体积比为500μl：100μl：100ml，搅匀后在2.5～4.0℃，6000r/min条件下离心30分钟，去除上清液，沉淀物即胶体金标记人血清白蛋白抗体。

5.根据权利要求4所述的斑点金渗滤试剂盒，其特征在于，所述柠檬酸三钠、鞣酸、K₂CO₃与双蒸水的体积比为4：0.08：0.08：15.84，所述胶体金液中形成直径为10＜D＜11nm的胶体金颗粒。

6.根据权利要求1所述的斑点金渗滤试剂盒，其特征在于，所述尿微量白蛋白层析器内设置有直径为2.8cm的反应盒，所述反应盒包括盒底和盒盖，所述盒盖顶面中央设置有一个上表面直径为0.56cm，下表面直径为0.27cm的小圆孔；所述反应盒内垫满吸水材料；在所述小圆孔下方和所述吸水材料上方之间放置一张1.18×1.18cm的包被人血清白蛋白抗体的硝酸纤维素膜。