[发明专利]一种富含生长因子的壳聚糖可溶性纱布的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种富含生长因子的壳聚糖可溶性纱布的制备方法。

背景技术

止血是紧急医疗救治的一个重要步骤，病人在手术治疗过程、日常生活中出现突发性创伤时，均需进行快速的止血。手术过程中创面止血，及术后伤口的换药是十分重要的环节，传统的敷料如纱布、敷伤巾等，不仅吸附性差，抑菌作用、与机体的相容性、透气、透湿等方面存在缺陷，创面肉芽组织容易长入敷料的网眼中，更换敷料时容易与创面的伤口粘连，损伤新生的肉芽组织和上皮组织，引起再次损伤和出血，加大了细菌感染的机率，不仅降低了伤口的愈合速度还会产生严重的并发症，不仅增加了患者的痛苦，又增加患者的经济负担。

随着医疗技术的发展，可溶性止血材料得到了广泛关注。壳聚糖[(1，4)-2-氨基-2-脱氧-β-D葡聚糖]是甲壳素[(1，4)-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D葡聚糖]经碱处理脱去乙酰基而制成的天然生物多糖分子，是天然多糖中唯一的碱性氨基多糖。壳聚糖具有良好的生物相容性，可生物降解，可促进凝血和血栓的形成，能抑制多种细菌和真菌的生长，而且具有促进创伤组织再生、修复、愈合，易于形成凝胶，来源广泛，价格低廉等优点。该类材料易于加工成型，适合作为敷料使用，成为新型医用生物止血材料的研究热点。

现在市场根据壳聚糖的生物特性，制成可溶性纱布，虽然抗菌性能优异，但成本很高，加重了病人的负担。也有将壳聚糖制成凝胶，但孔径在50μm左右，无法提供细胞生长和营养血管的空间，影响细胞分泌基质和营养物质的渗入，所以只适合皮肤表面的止血，无法满足适合体内止血的要求。

发明内容

本发明的目的在于提供一种富含生长因子的壳聚糖可溶性纱布的制备方法，在壳聚糖形成凝胶的基础上，加入富血小板血浆(platelet-rich plasma)，制备一种富含生长因子的壳聚糖可溶性纱布，孔径在130-160μm之间，内含大量的生长因子和丰富的纤维蛋白网络，不仅易被人体吸收，无毒副作用，能抑制多种细菌和真菌的生长，为细胞生长提供了更多的结构空间，在体内、体外均可释放各种生长因子，更利于组织的修复和血管重塑。

本发明的目的通过以下技术方案实现：

一种富含生长因子的壳聚糖可溶性纱布的制备方法，包括如下步骤：

S1、按照重量比例称取辅料配置血小板预处理液；

S2、制备血小板冻干缓冲液；

S3、制备预处理的富血小板血浆(platelet-rich plasma，PRP)；

S4、配置羧甲基壳聚糖(carboxyethyl chitosan，CC)溶液；

S5、制备富含生长因子的壳聚糖可溶性纱布。

所述的辅料由包含以下重量份的原料组成：3.214gNaCl、0.157gKCl、0.078gCaCl₂、0.271gMgSO₄、2.604gNaHCO₃、0.714g柠檬酸、1.970g柠檬酸钠、1.230g乙酸钠、2.120g葡萄糖、17.117g海藻糖。

S1中所述血小板预处理液的配置方法包括：将3.214gNaCl、0.157gKCl、0.078gCaCl₂、0.271gMgSO₄、2.604gNaHCO₃、0.714g柠檬酸、1.970g柠檬酸钠、1.230g乙酸钠、2.120g葡萄糖、17.117g海藻糖均匀混合后，用超纯水溶解并定容至1L，按1ml所述血小板预处理液加入1ul可逆性血小板激活抑制剂的比例加入可逆性血小板激活抑制剂前列腺素E1，然后加入NaHCO₃来调节pH为6.6～6.8，然后用0.22um滤器过滤后备用。

S2中所述血小板冻干缓冲液的制备方法包括：在S1中所述血小板预处理液中加入体积分数为30％(vol/vol)的蛋白质类保护剂调节pH为6.6～6.8，然后用0.22um滤器过滤后备用。

S2中所述蛋白质类保护剂选自血浆。

S3中所述预处理的富血小板血浆的制备方法包括：汇集6-8人份的血小板，通过离心处理并移去上层清液得沉淀A，然后用S1中所述血小板预处理液重悬所述沉淀A，调整所述沉淀A中的血小板计数，在37℃水浴震荡4h，使血小板保持悬浮状态，将上述血小板悬液离心处理并移去上层清液得沉淀B；然后将S2中所述血小板冻干缓冲液离心处理并移去上层清液得沉淀C，将所述沉淀B和沉淀C按照等体积混合重悬血小板，即得预处理的富血小板血浆。