[发明专利]一个从动物组织中快速提取RNA的方法

说明书

本发明涉及分子生物学领域，具体地涉及一个从动物组织中快速提取RNA的方法。该方法主要包括两个大步骤：第一步是从组织中快速分离细胞。步骤为：将组织切成小块，称重；加入PBS，研磨均匀，得到组织匀浆；低速离心，让比较大的组织残渣沉淀下来，单个的细胞仍然悬浮在上清中；取带有悬浮的细胞的上清加PBS混匀，离心去上清，得到的沉淀即为分离出来的细胞。第二步是用核酸提取试剂从细胞中快速提取RNA。步骤为：向细胞中加入核酸提取试剂，混匀；室温静置以裂解细胞；75℃加热10分钟；将样品放在冰上冷却，即为制备好的RNA，可用于基因表达水平检测或基因克隆等工作。本发明的方法优点是操作简单，速度快，使用的试剂成本低而且基本无毒无异味。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体地涉及一个从动物组织中快速提取RNA的方法。

背景技术

生物医学研究和临床上进行基因表达水平检测或基因克隆等工作之前，都要将核酸从生物样品中提取出来。这里提到的生物样品，包括培养的细胞、动植物组织、体液（如血液、痰液、组织液等）、微生物样品等。众所周知，核酸包括DNA和RNA。DNA是遗传信息的携带者，而RNA是将DNA携带的遗传信息转变为有功能的蛋白质的中间桥梁；另外，RNA在生物体内还有多种复杂的调节功能。当需要检测基因表达水平，以研究相关的生物学功能的时候，RNA是极其重要而且常用的研究对象。检测的第一步就是将RNA从生物样品中提取出来。当需要深入研究某种蛋白质的结构、功能时，通常需要克隆编码这个蛋白质的基因。mRNA（信使RNA）是进行基因克隆的常用模板。要得到mRNA，也需要从生物样品中提取RNA。

在上面提到的各种生物样品中，动植物组织是非常重要的研究对象。这是因为生物学研究的最终目标是解释完整的生物体内发生的各种现象；医学的目的是治疗疾病促进人体健康。这些必然要求研究的样品能够真实准确地反映活的生物体内的状况和生物学过程。在各种生物样品中，组织样品无疑是最符合这个要求的，最能够反映生物体的状况。因此，随着当前研究的进步，从组织中提取RNA并进一步检测基因表达的需求越来越多。

目前常用的组织RNA提取试剂（如TRIzol试剂）都采用酚、胍盐、表面活性剂、氯仿等作为样品裂解、RNA纯化试剂；常用的操作方法有手工法和吸附柱法等。这些传统的操作方法的突出缺点是耗时较多，完成一次RNA提取需要至少一个小时，加上逆转录的时间则为两个小时甚至更久，完全无法满足现在日益增长的高通量检测需求。而且，几种传统的操作方法都比较复杂，要对相关的操作人员进行严格的培训。例如手工法和吸附柱法都需要经过多次的离心和液体吸取等操作，需要操作人员具有相当的能力才能完成。另外，传统的RNA提取试剂多数都具有较强的毒性和腐蚀性，还有强烈的刺激性气味，对操作人员的健康和环境都有很大的危害。因此，为了满足越来越多的科研和临床检测需求，迫切需要快速、经济的组织RNA提取方法来取代传统方法。

目前，对于培养的细胞已经有了快速的RNA提取方案。如美国EZBioscience，Ambion，德国Qiagen品牌都有易用的Cell to cDNA（细胞到cDNA）试剂盒，能够在半小时到一小时之内完成RNA提取和逆转录的过程，相比传统方法节省了大约一个小时的时间。但是，至今为止仍然没有一个从组织中提取RNA的简单、快速方法，主流的方法仍然是传统的TRIzol法，操作复杂费时。而在现实中，基础研究中为了检测生物体内发生的基因表达变化，从而更好地了解相关的生物学过程，需要从组织中提取RNA；临床上采集到病人的组织样本，为了检测疾病相关基因表达，从而达到个体化精准诊断、治疗的目的，同样需要从组织中提取RNA。这样，快速增长的从组织中快速提取RNA的需求，和传统的TRIzol法的低效率之间的矛盾日益突出；国内外各试剂厂商至今也并没有推出能够满足需求的真正快速、稳定且价格合理的组织RNA提取试剂盒或方法。