[发明专利]一种胰岛素抗体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及体外诊断免疫检测领域，具体地，本发明提供了一种胰岛素抗体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

胰岛素自身抗体（Insulin autoantibodies，IAA）是胰岛素依赖型糖尿病 （Insulin-dependent diabetes mellitus，IDDM）或称1型糖尿病（type 1 diabetes mellitus，T1DM）个体的一种特异性免疫学标志物，IDDM是由于胰腺中的β细胞遭到免疫破坏，最终导致胰岛素分泌不足引起的。在有患IDDM基因倾向的个体中，对β细胞的免疫性破坏发生于一个无症状的时期，这个时期被称为糖尿病前期，在IDDM的临床诊断之前，糖尿病前期就已经存在多年，在这个时期，人体血清中可检测出胰岛素自身抗体和胰岛素细胞抗体。因此，检测胰岛素自身抗体对于IDDM的早期诊断具有重要的临床意义。

IAA是唯一仅识别β细胞特异性抗原的抗体，对于预测1型糖尿病的发生有较高的价值。然而，IAA尚可存在于病毒感染、药物反应、多内分泌腺病或其他自身免疫性疾病患者中。

临床检测胰岛素抗体的常见方法有放射性免疫法、酶联免疫吸附法，但这些方法都存在着一些不足之处。

一、放射性免疫法

该方法的基本原理是先用放射性的I¹²⁵ 标记重组IAA抗原，血清中的特异性抗体先与抗原结合形成抗原抗体复合物，加入二抗后孵育形成抗原-抗体-二抗复合物，离心后检测放射性强弱从而判断血清中特异性抗体的含量。该方法技术较成熟，但是其不足也很明显：

（1）放射性对操作者身体有影响；

（2）操做相对较复杂，需要离心机和发射性检测装置，很多基层医院难以推广；

（3）本底高，特异性不好；

二、酶联免疫吸附法

酶联免疫吸附法(ELISA) 被广泛应用，但该方法也存在着下述的不足之处：

(1) 使用12×8型、6×8型、8×12型或整板型96孔专用微孔板作为抗原包被用具和反应容器，在使用时只能分成12批次、6批次、8批次或整板一次使用，无法进行独立的、单人份的检测；

(2) 定量测定所用的试剂种类较多，每一种检测试剂都要用试剂瓶来盛装，并且每使用一种试剂时都需要更换吸液嘴来分别加注到微孔板的微孔中，不但试剂瓶种类多，加注试剂的操作也极为繁琐；

(3) 缺少对检测信息的相应标注，只能通过查看试剂盒外包装盒的标识才能了解或知悉检测试剂的生产批号及有效期信息，而且所知悉的信息在检测过程中不受控，具有很大的随意性；

(4) 检测试剂在检测过程中处于开放的空间，容易引起各种试剂之间的交叉污染而影响检测结果的准确性；

(5) 检测过程多采用手工操作，试剂或样本的加量不很精确，操作过程极为繁琐和复杂，容易发生操作差错，检测结果的准确度和精密度较差。

发明内容

目前胰岛素抗体检测技术存在以下缺点：检测成本高、检测灵敏度低、重现性低、操作复杂等。

本发明正是为了克服以上所述缺点，公开了一种检测成本低、灵敏度高、重现性高、操作简单的胰岛素抗体试剂盒及其制备方法。本发明首先制备化学发光免疫分析试剂盒，主要包括：胰岛素包被的磁微粒、吖啶酯标记的抗人IgG以及胰岛素抗体定标品；然后利用全自动化学发光免疫分析仪对定标品进行检测，绘制标准曲线，内置于电脑软件，测试实际样本，根据样本发光值计算样本浓度；最后对胰岛素抗体全自动化学发光免疫分析系统进行性能（灵敏度、线性、精密度、干扰性）的评价。

本发明与目前技术相比，具有以下优点：

1、本发明选择吖啶酯作为标记材料，并应用于化学发光免疫分析系统，该发光体系为直接化学发光，与传统的酶促化学发光相比，该反应不需要酶的参与，更加节约成本；

2、本发明选用的吖啶酯化学发光免疫分析系统检测灵敏度高，能够达到0.04 U/mL，相比其它的胰岛素抗体检测方法灵敏度至少提高了10倍；

3、本发明选用的吖啶酯化学发光免疫分析系统线性范围宽，能达到5-300U/mL，其它的胰岛素抗体化学发检测方法的检线性范围为10-200U/mL；

4、本发明选用的吖啶酯化学发光免疫分析系统重复性高，批内及批间差均在5%以内，这是其它化学发光免疫分析系统难以达到的；

5、本发明的化学发光免疫分析系统已实现样本的定量，通过内置标准曲线到测试软件，只需测试样本就可直接得到样本的浓度值；