[发明专利](1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环丙胺D-扁桃酸盐（Ⅰ）的生物制备方法

权利要求书

1.一种式Ⅴ化合物的制备方法，其特征在于，包括步骤：

(a)在液态反应体系中，以式Ⅵ化合物为底物，在辅酶存在下，在羰基还原酶催化下，进行不对称还原反应，从而形成式Ⅴ化合物；

和

(b)任选地从所述上一步骤的反应后的反应体系中分离出式Ⅴ化合物；

所述羰基还原酶为来源于M.luteolum JCM 9174的羰基还原酶QNR，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；

所述的反应体系中，还存在用于辅酶再生的酶；所述用于辅酶再生的酶为醇脱氢酶，其基因选自：

(d)SEQ ID NO.3所示的序列。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的反应体系中，羰基还原酶为游离形式的酶、固定化酶、或菌体形式的酶。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的羰基还原酶QNR的编码基因序列选自下组：

(a)SEQ ID NO.1所示的序列。

4.根据权利要求1-3中任一所述的制备方法，其特征在于，所述的辅酶选自：还原性辅酶、氧化性辅酶，或其组合。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述氧化性辅酶选自NAD、NADP、或其组合。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述NAD用量与底物用量比率为0.01％～1.0％(w/w)。

7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述NAD用量与底物用量比率为0.01％～0.5％(w/w)。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的反应体系中，还存在共底物。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述的反应体系中，共底物的浓度为5-30％。

10.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述的共底物选自下组：异丙醇、葡萄糖、甲酸铵、或其组合。

11.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的反应体系还含有助溶剂。

12.根据权利要求11所述的制备方法，其特征在于，所述的助溶剂选自下组：二甲基亚砜，甲醇，乙醇，异丙醇，乙腈，甲苯、丙酮、或其组合。

13.根据权利要求11所述的制备方法，其特征在于，所述助溶剂的浓度为5～30％。

14.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的反应体系为磷酸缓冲盐体系。

15.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述反应体系中，所述式Ⅵ化合物的浓度为50～200g/L。

16.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤(b)中，所述反应后的反应体系中，式Ⅴ化合物的ee值≥90％。

17.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤(b)中，所述反应后的反应体系中，式Ⅴ化合物的ee值≥95％。

18.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤(b)中，所述反应后的反应体系中，式Ⅴ化合物的ee值≥99％。

19.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤(b)中，所述反应后的反应体系中，≥80％式Ⅵ化合物被转化为式Ⅴ化合物。