[发明专利]一类标记和/或检测细胞中脂滴的荧光探针及其制备和应用

说明书

本发明属于生物分析检测领域，本发明涉及一类标记和/或检测细胞中脂滴的荧光探针及其制备和应用。该探针是以4‑溴‑1,8‑萘二甲酸酐为起始原料合成获得，它以1,8‑萘酰亚胺为荧光团，C12烷基长链为特异性脂滴定位基团，萘环4位的含N基团为荧光增强及稳定基团。该类探针制备简单，产率高。与现有尼罗红类及氟硼荧类脂滴荧光探针相比光稳定性高，斯托克位移大，更适合荧光成像。在细胞标记荧光成像及生物医学领域有极其重要的应用价值。

技术领域

本发明属于生物分析检测领域，具体涉及一类标记和/或检测细胞中脂滴的荧光探针及其制备方法和应用。

背景技术

脂滴是一个复杂、动态变化的多功能细胞器，由磷脂单分子层及中性脂构成疏水核心，并且表面分布有多种蛋白。长期以来，脂滴一直被认为是一种用来贮存能量的惰性内含物，因此并未引起科研人员的重视，但最新的研究表明，脂滴与跨膜运输、信号转导以及特殊情况下能量供应息息相关。脂滴广泛存在于几乎各类细胞中，已有研究表明细胞内脂滴含量的变化与肥胖、糖尿病以及动脉硬化等代谢紊乱性疾病息息相关，因此了解脂滴的生物学意义显得尤为重要。

荧光探针已成为细胞生物学研究中的重要工具，它使研究者能在复杂生物环境中直观地看到生理生化反应过程。在脂滴研究中，利用特异性的脂滴定位荧光探针能直观地对细胞内脂滴的分布及含量进行分析，实现对细胞中脂滴生理生化过程的监控及相关疾病(包括肥胖症、糖尿病、动脉硬化等)的前期诊断。目前仅有少数几种脂滴特异性荧光探针报道，其中应用最为广泛的是尼罗红及氟硼荧两大类。用尼罗红来标记脂滴，其特异性不高，能对细胞内大部分结构进行染色，因此背景较强，难以将脂滴与细胞内其他结构区分。而氟硼荧类探针由于斯托克位移小，同时荧光不稳定易发生荧光淬灭，因此不利于长时间荧光成像分析。综上所述，开发出新型光稳定的特异性脂滴标记荧光探针在细胞成像及相关疾病前期诊断上有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一类标记和/或检测细胞中脂滴的荧光探针及其制备方法和应用。该探针在复杂环境下能够实现对脂滴的特异性标记，具有斯托克斯位移大，光稳定性好的优点，在荧光成像上与传统脂滴标记染料尼罗红及氟硼荧相比有显著优势。同时在探针的合成上具有原料廉价易得、步骤简单、适合放大合成的优点。

本发明采用的技术方案为：

一类标记和/或检测细胞中脂滴的荧光探针，具有如下结构通式(I)：

R为含氮基团，选自N,N-二甲基，氮丙啶，氮杂丁环，四氢吡咯，哌啶。

在本发明中所述荧光探针是以1,8-萘酰亚胺为荧光母体，烷基长链为定位基团，烷基链长度为，萘环4位的含氮基团为荧光增强及稳定基团。

本发明还提供所述荧光探针的制备方法：

合成步骤如下：

1)N-十二烷基-4-溴-1,8-萘酰亚胺的合成：将4-溴-1,8-萘酐按0.02-0.1g/mL比例用乙醇溶解，再加入相对于4-溴-1,8-萘酐1.5-2倍摩尔质量的十二烷基胺，80-100℃下回流反应8-12小时，停止加热，降至室温，将析出的固体过滤，用乙醇洗涤得到N-十二烷基-4-溴-1,8-萘酰亚胺；