[发明专利]一种高同型半胱氨酸血症诱导肝脏纤维化模型的建立方法

权利要求书

1.一种高同型半胱氨酸血症诱导肝脏纤维化模型的建立方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、制备体内高蛋氨酸饮食诱导高同型半胱氨酸血症模型：

步骤2、高同型半胱氨酸血症通过USP22诱导肝脏纤维化，建立高同型半胱氨酸血症诱导肝脏纤维化模型；

所述步骤1中的制备体内高蛋氨酸饮食诱导高同型半胱氨酸血症模型具体为：

步骤1.1、选择20只6-8周龄的C57BL/6小鼠，随机分成2组，每组10只，一组为正常组，喂养正常的饲料，一组为造模组，喂养含质量百分含量为2％的高蛋氨酸饲料，2周后，处死小鼠，下腔静脉采血，收集小鼠的血液检测同型半胱氨酸的水平，收集小鼠肝脏组织进行马松染色评估肝脏纤维化的情况，蛋白印记法，免疫组化法检测胶原蛋白I的表达情况，如果马松染色结果看到造模组明显纤维化，免疫组化看到造模组中细胞胞外，胞质中胶原蛋白I表达明显，具有明显的统计学意义，则造模成功；

步骤1.2、确定体内HCY诱导肝星状细胞纤维化的最佳处理时间：正常培养的肝星状细胞，采用初定浓度为24μM同型半胱氨酸预处理，分别12h，24h，48h，72h后收集细胞，采用蛋白印记法，免疫荧光法检测胶原蛋白I的表达情况；

步骤1.3、确定处理浓度：正常培养的肝星状细胞，采用浓度为6-48μM同型半胱氨酸预处理，48小时后收集细胞，采用蛋白印记法，免疫荧光法检测胶原蛋白I的表达情况；

所述步骤2中的高同型半胱氨酸血症通过USP22诱导肝脏纤维化，建立高同型半胱氨酸血症诱导肝脏纤维化模型具体为：

步骤2.1、体内：采用蛋白印记法，免疫组化法检测泛素水解酶22在正常小鼠和肝脏纤维化小鼠肝脏组织中的表达情况，模型组中尾静脉注射siRNAUSP22预处理，下调泛素水解酶22在纤维化小鼠肝脏中的表达，收集肝脏组织进行HE，马松染色评估肝脏纤维化的情况，蛋白印记 ，免疫组化检测泛素水解酶22、胶原蛋白I的表达情况；

步骤2.2、体外：采用蛋白印记法，免疫荧光法检测肝星状细胞中泛素水解酶22的表达情况，肝星状细胞模型组内转染si RNA，下调泛素水解酶22在肝星状细胞中的表达，收集肝星状细胞进行蛋白印记 ，免疫荧光法检测泛素水解酶22，胶原蛋白I的表达情况。