[发明专利]靶向CD123的嵌合抗原受体及其用途

说明书

本发明涉及靶向CD123的嵌合抗原受体及其用途。具体而言，本发明提供一种多核苷酸序列，选自：(1)含有依次连接的抗CD123单链抗体的编码序列、人CD8α铰链区的编码序列、人CD8跨膜区的编码序列、人41BB胞内区的编码序列、人CD3ζ胞内区的编码序列和任选的EGFR的含胞外结构域III和胞外结构域IV的片段的编码序列的多核苷酸序列；和(2)(1)所述多核苷酸序列的互补序列。本发明还提供相关的融合蛋白、含所述编码序列的载体，以及所述融合蛋白、编码序列、载体的用途。

技术领域

本发明属于嵌合抗原受体领域，具体涉及靶向CD123的嵌合抗原受体及其用途。

背景技术

急性髓系白血病是一类严重威胁人类健康的血液系统恶性肿瘤。目前除急性早幼粒细胞白血病以外的AML疗效均不容乐观，预后大多不良。传统的化疗药物无法从根本上解决复发和耐药的巨大难题，而造血干细胞移植费用高昂，风险很大，且移植后也有复发的可能，因此急需深入探讨AML发生、发展、复发及耐药的机制，研发新的治疗药物以改善疗效。

美国Jordan等对急性髓系白血病(AML)干细胞的研究表明，CD123是该种细胞特异性抗原，这一发现为彻底治疗AML提供了新的思路(Leukemia 2000，14∶1777)。CD123是IL-3受体的α链的跨膜片段，主要表达在急性髓系白血病细胞中(Targeting myeloid leukemiastem cells，Sci Transl Med.，2010；2(31):31ps21)，同时也表达在正常的造血干细胞中，在功能上与造血干细胞的分化相关(Humanhemato-lymphoid system mice:current useand future potential for medicine，Annu Rev Immunol，2013；31:635-674)；有研究表明用CD123抗体治疗急性髓系白血病具有比较好的耐受，CD123-CART的临床前实验也表明其对造血干细胞没有明显的毒性(T cells expressing CD123-specific chimericantigen receptors exhibit specific cytolytic effector functions and antitumoreffects against human acute myeloid leukemia，Blood，2013，122(18):3138-3148)；CD123是白细胞介素3受体α链，能特异识别并结合白细胞介素3。IL-3主要由受到抗原剌激而被活化的辅助T细胞产生，可促进细胞的生长和增殖。它与肿瘤、过敏性炎症、自身免疫性疾病的发生有关。CD123在大多数AML患者原始白血病细胞中表达。

嵌合抗原受体(Chimeric Antigen Receptor-T cell，CAR-T)T细胞是指经基因修饰后，能以MHC非限制性方式识别特定目的抗原，并且持续活化扩增的T细胞。2012年国际细胞治疗协会年会中指出生物免疫细胞治疗已经成为手术、放疗、化疗外的第四种治疗肿瘤的手段，并将成为未来肿瘤治疗必选手段。CAR-T细胞回输治疗是当前肿瘤治疗中最明确有效的免疫治疗形式。大量研究表明，CAR-T细胞可以有效的识别肿瘤抗原，引起特异性的抗肿瘤免疫应答，显著改善患者的生存状况。

嵌合抗原受体(CAR)是CAR-T的核心部件，赋予T细胞HLA非依赖的方式识别肿瘤抗原的能力，这使得经过CAR改造的T细胞相较于天然T细胞表面受体TCR能够识别更广泛的目标。CAR的基础设计中包括一个肿瘤相关抗原(tumor-associated antigen，TAA)结合区(通常来源于单克隆抗体抗原结合区域的scFV段)，一个胞外铰链区，一个跨膜区和一个胞内信号区。目标抗原的选择对于CAR的特异性、有效性以及基因改造T细胞自身的安全性来讲都是关键的决定因素。

随着嵌合抗原受体T细胞(Chimeric Antigen Receptor-T cell，CAR-T)技术的不断发展，目前CAR-T主要可划分为四代。