[发明专利]一种抗干扰的D‑3羟丁酸检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗干扰的D-3羟丁酸检测试剂盒，主要涉及到体外临床检测领域，该产品是生物工程层次重要的高技术产品。

背景技术

随着社会进步，生活水平日益提高，生活中营养过剩，导致糖尿病发率日趋升高，在糖尿病中糖尿病酮症酸中毒是其中一项较为常见的疾病。造成该病的原因主要是血液中血酮体升高引起，酮体主要有三种成分组成，D-3羟丁酸，丙酮酸和乙酰乙酸，但是其中D-3羟丁酸占了总体70%，酮症诊断如果不及时诊断和治疗会给患者带来生命危险，因此D-3羟丁酸检测意义重大不可忽视。

D-3羟丁酸检测有色谱法、电泳法、化学放射法和酶法检测，化学放射法因其危害程度大，不能普及；电泳法操作时间长，操作复杂，不易大批量操作；色谱法特异性差，重复性低；酶法检测抗干扰能力弱，稳定性低。

鉴于以上因素，我们发明了一种抗干扰稳定的D-3羟丁酸检测试剂盒，该发明是在酶法的基础上进行了改进，解决了抗干扰问题和稳定性问题。

发明内容

针对酶法D-3羟丁酸检测试剂盒抗干扰能力弱和稳定性低问题，本发明试剂盒一种抗干扰的D-3羟丁酸检测试剂盒，解决了上述问题。

本发明是通过以下措施实现的：

采用酶法检测来测定血清中的D-3羟丁酸含量，D-3羟丁酸在D-3羟丁酸脱氢酶作用下，NAD提供能量，将D-3羟丁酸氧化成乙酰乙酸和NADH，还原性辅酶INADH在黄迪酶作用下将NBT催化成红色物质，引起505nm处吸光光度值的变化，通过计算吸光光度值变化来计算NADH含量，间接反映出D-3羟丁酸含量。

应用本发明试剂盒，参数设置如下：波长505nm，样本量：试剂R1：试剂R2=10μl：240μl:60μl，反应方向正方向，两点终点，以下实施案例检测均在BS-800全自动生化分析仪上进行检测。

本发明可以应用到迪瑞、迈瑞、日立、东芝等系列的全自动化分析仪中进行自动化检测。

应用本发明检测时，涉及参数如下：以BS-800为例，波长为505nm，样本量：试剂R1：试剂R2=10μl：240μl:60μl，反应方向正方向，两点终点，样本针吸取样本后于试剂R1中进行孵育，以保证反应环境外界条件的稳定，然后读取吸光光度值为ΔA1，进而加入试剂R2，D-3羟丁酸被氧化成乙酰乙酸，NAD被还原成NADH，后者与NBT在黄迪酶作用下生成红色物质，引起505nm波长处吸光光度值的变化，这与NAD的含量成线性关系反应5分钟记录ΔA2，通过计算NAD含量进而计算出D-3羟丁酸含量。

D-3羟丁酸含量=吸光光度值（ΔA2-ΔA1）*标准液浓度

相对于市场上目前流通的重氮法直接胆红素检测试剂盒，本发明试剂盒，重复性好，抗干扰能力强，试剂稳定性好，适用于全自动生化分析仪，临床使用价值较大。

附图说明

图1 实施例1抗干扰性能本发明试剂盒检测结果与对照试剂检测结果对比；

图2 实施例2稳定性能本发明试剂盒检测结果与对照试剂检测结果对比；

图3 实施例3本发明试剂盒与对照试剂盒线性检测结果对比；

图4 实施例4本发明试剂盒与对照试剂盒重复性检测结果对比。

具体实施方式

为了更好的理解本发明，下面结合具体实施例来进一步详细说明。

实施例1

本发明在具体实施例中，所述的试剂R1为：

HEPS缓冲液 0.4M

NAD2.5mM

NBT2mM

聚乙二醇 0.5%

葡聚糖 1.0g/L

甘露醇 5.5g/L

氯化钠 0.9%

三氯甲烷 0.1%

EDTA-2Na 0.1%

VC氧化酶 2500U/L。

试剂R2组成为：

柠檬酸-甘酸缓冲液0.1M

D-3羟丁酸脱氢酶3000U/L

氯化钠 0.9%

葡聚糖 1.0g/L

甘露醇 4.5g/L

丙三醇 10%。

实施例2

本发明在具体实施例中，所述的试剂R1为：

HEPS缓冲液 0.3M

NAD1mM

NBT2mM

聚乙二醇 0.5%

葡聚糖 1.0g/L

甘露醇 5.5g/L

氯化钠 0.9%

三氯甲烷 0.1%

EDTA-2Na 0.1%