[发明专利]一种诱导杜鹃兰原球茎芽簇增殖的方法

权利要求书

1.一种诱导杜鹃兰原球茎芽簇增殖的方法，其特征在于：以种子萌发的原球茎为外植体，经组织培养诱导芽簇增殖与分化出苗，并通过生根培养、炼苗移栽后获得健壮的杜鹃兰植株；

具体步骤如下：

步骤1：采用人工授粉获得的杜鹃兰种子接种于培养基中进行培养，萌发获得的原球茎作为组织培养的外植体；

步骤2：将步骤1中的外植体接种于原球茎增殖培养基上进行原球茎增殖培养直至原球茎颜色由白色转为黄绿色，形成簇状原球茎且表面有白色毛状物；

步骤3：挑选步骤2中生长健壮的原球茎接种于芽簇诱导培养基上进行芽簇诱导培养诱导原球茎形成芽簇；

步骤4：将步骤3中的芽簇分割成两部分，一部分是芽簇中未分化的原球茎，将其接入步骤3中芽簇诱导培养基中继续诱导芽簇形成；另一部分是基部明显膨大且具有分化成苗趋势的原球茎，将其接入生根培养基上进行生根培养直至长出3～5条长为2～3cm根的健壮杜鹃兰幼苗；

步骤5：将步骤4中成功诱导生根的健壮杜鹃兰幼苗转至炼苗室，3～5d后，打开封口膜取出幼苗，洗净幼苗根上附着的培养基，并吸干水分，然后用800倍多菌灵溶液浸泡其根5min，移栽到苗床上，喷水保湿，2个月后移栽上盆，获得生长健壮的杜鹃兰植株；

步骤1中的培养基为KC+NAA0.7mg·L^-1+6-BA 1.5mg·L^-1+蔗糖30g·L^-1+活性炭0.5g·L^-1+土豆汁75g·L^-1；

步骤2中的原球茎增殖培养基为1/2MS+6-BA 1.0mg·L^-1+IBA 1.0mg·L^-1+活性炭0.5g·L^-1+蔗糖30g·L^-1+琼脂5.5g·L^-1；

步骤3中的芽簇诱导培养基为以不含蔗糖的1/4MS、1/2MS或MS为基本培养基，分别添加TDZ 1.5～2.5mg·L^-1+NAA0.1～0.3mg·L^-1+蔗糖10～30g·L^-1+琼脂5.5g·L^-1；

步骤4中的生根培养基为1/4MS+6-BA2.0mg·L^-1+NAA0.1mg·L^-1+活性炭0.5g·L^-1+蔗糖30g·L^-1+琼脂5.5g·L^-1。

2.根据权利要求1所述的诱导杜鹃兰原球茎芽簇增殖的方法，其特征在于：步骤3的芽簇诱导培养基为1/4MS+TDZ 1.5mg·L^-1+NAA0.3mg·L^-1+蔗糖20g·L^-1+琼脂5.5g·L^-1。